一、Apo(a)表型检测的方法学

Apo(a)表型检测方法主要有两大类,一类应用SDS-PAGE分离载脂蛋白,然后结合免疫印迹技术检测不同Apo(a)表型;另一类方法的不同之处在于用SDS-agarose(琼脂糖)电泳代替SDS-PAGE分离载脂蛋白,使检测分辨率大为提高。 Utermann等(1987)应用-SDS垂直板PAGE结合免疫印技术,检出6种Apo(a)异构体,共14种临床表型。应用此法仅有50%受试者可检出Apo(a)异构体区带,Kraft等(1988)将上法垂直板电泳槽改为水平板式,避免了带型之间污染问题且使方法更适合于大批量标本检测。Huang等(1991)将生物素-亲和素放大技术引入Utermann法免疫印迹检测系统,使检测灵敏感大大提高,88%的受试者均可检出Apo(a)异构体区带。1990年Gaubatz等应用含0.75%agarose的SDS-PAGE结合免疫印迹技术,发现美国人中共有在11种Apo(a)异构体,共32种表型。仅有1%受试者未检出任何一种Apo(a)异构体。 Kamboh等(1991)报道应用SDS-agarose电泳结合免疫印迹技术检测Apo(a)表型的方法,检出23种不同Apo(a)异构体,共115种表型。Geroldi等(1993)将Kamboh法加以改良,以毛细管印迹(capillary blottiog)代替传统的电转移法,并用聚偏二氟乙烯(PVDF)膜代替传统的硝酸纤维素(NC)膜,使检测方法更为简便、经济,更适合于大规模人群调查。Marcovina等(1993)应用SDS-1.5%agarose凝胶电泳结合免疫印迹技术,首次报道人类至少有35种Apo(a)异构体,此法是在Kamboh等法基础上发展起来的一种高分辨的新分析方法。 上述两类方法有许多相似之处,即首先采用电泳技术将Apo(a)与其他载脂蛋白分离,然后应用转移免疫印迹技术(Western immunoblotting),灵敏而特异地显示Apo(a)多态区带的位置,最后根据其与ApoB100电泳速率比较或根据其分子量大小而确定Apo(a)表型。