一、Apo（a）表型检测的方法学

Apo（a）表型检测方法主要有两大类，一类应用SDS-PAGE分离载脂蛋白，然后结合免疫印迹技术检测不同Apo（a）表型；另一类方法的不同之处在于用SDS-agarose（琼脂糖）电泳代替SDS-PAGE分离载脂蛋白，使检测分辨率大为提高。 Utermann等（1987）应用-SDS垂直板PAGE结合免疫印技术，检出6种Apo（a）异构体，共14种临床表型。应用此法仅有50%受试者可检出Apo（a）异构体区带，Kraft等（1988）将上法垂直板电泳槽改为水平板式，避免了带型之间污染问题且使方法更适合于大批量标本检测。Huang等（1991）将生物素-亲和素放大技术引入Utermann法免疫印迹检测系统，使检测灵敏感大大提高，88%的受试者均可检出Apo（a）异构体区带。1990年Gaubatz等应用含0.75%agarose的SDS-PAGE结合免疫印迹技术，发现美国人中共有在11种Apo（a）异构体，共32种表型。仅有1%受试者未检出任何一种Apo（a）异构体。 Kamboh等（1991）报道应用SDS-agarose电泳结合免疫印迹技术检测Apo（a）表型的方法，检出23种不同Apo（a）异构体，共115种表型。Geroldi等（1993）将Kamboh法加以改良，以毛细管印迹（capillary blottiog）代替传统的电转移法，并用聚偏二氟乙烯（PVDF）膜代替传统的硝酸纤维素（NC）膜，使检测方法更为简便、经济，更适合于大规模人群调查。Marcovina等（1993）应用SDS-1.5%agarose凝胶电泳结合免疫印迹技术，首次报道人类至少有35种Apo（a）异构体，此法是在Kamboh等法基础上发展起来的一种高分辨的新分析方法。 上述两类方法有许多相似之处，即首先采用电泳技术将Apo（a）与其他载脂蛋白分离，然后应用转移免疫印迹技术（Western immunoblotting），灵敏而特异地显示Apo（a）多态区带的位置，最后根据其与ApoB100电泳速率比较或根据其分子量大小而确定Apo（a）表型。