四、血清Lp(α)测定法
1.原理
血浆(清)中脂蛋白(α)(Lp(α))与Lp(α)的单克隆抗体(鼠)结合形成抗原抗体免疫复合物,有浊度改变,测定溶液界质中混浊度的光密度改变,求其血浆中Lp(α)的含量。
Lp(α)+抗人Lp(α)→抗原抗体复合物→测定光密度
2.试剂与仪器
试剂(第一化学);Lp(α)缓冲液(R1);Lp(α)抗体液(R2)。
仪器:生化分析仪(以CL-7200型为例)
3.操作方法
[img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/dongmaizhouyangyinghua/dongmaizhouyangyinghua119.jpg[alt][/alt][/img]
以△A=A[XB]2[/XB]-A[XB]1[/XB]进行运算Lp(α)浓度。
4.定标:
取Lp(α)定值液,用0.9%NaCl液稀释。
采用上述操作步骤,按免疫测定法定标,其操作方法及标准曲线如图16-3所示。
[img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/dongmaizhouyangyinghua/dongmaizhouyangyinghua120.jpg[alt]Lp(α)免疫测定法的反应过程光密度变化值mAbs(A)及其检测的标准曲线图[/alt][/img]
图16-3 Lp(α)免疫测定法的反应过程光密度变化值mAbs(A)及其检测的标准曲线图(B)(CL-7200型)
上机参数(以CL-72OO型为例)
名称 | LPA | 名称 | LPA | |
测定方法 | Endpoint | 标准(1) | 0.72 | |
标本量 | 16μl | 标准(2) | 1.44 | |
R[XB]1[/XB]试剂量 | 280μl | 标准(3) | 2.88 | |
R[XB]2[/XB]试剂量 | 40μl | 标准(4) | 5.75 | |
反应时间 | 第一波长 | 5min | 标准(5) | 11.5 |
第二波长 | 4.99min | 波长1.2 | [340][750] | |
5.注意事项:
(1)操作时,标本和试剂无需处理;
(2)血浆或血清标本均可检测。标本置2~21℃保存1周不变;
(3)标本浓度超过定标最高值时,应用生理水稀释后再测;
(4)抗体试剂(R[XB]1[/XB])避免反复接触;
(5)测定时避免日光直接照射。