二、Hatch-Lee法（同时分离血浆脂蛋白方法）

[b]1．试剂[/b] 0.5mol/LEDTA（pH8.0）:186g EDTA-Na[XB]2[/XB]加入去离水950ml，用NaOH调准pH值，再加水到1L。 溶液①（d=1.006）:NaCl 11.40g,0.5ml0.5mol/L EDTA液，加去离子水1l，EDTA可抑制脂蛋白中脂质的氧化。 溶液②（d=1.182）:NaBr24.98g溶于溶液①100ml中。 溶液③（d=1.478）:NaBr78.32溶于溶液②100ml中。 0.15mol/LNaCl,0.3mlEDTA:8.77g NaCl、0.6ml的0.5mol/l EDTA（pH8.0），再加双蒸水到1L。 d=1.019液：1.851gKBr溶于溶液①100ml中。 d=1.063液：8.343gKBr溶于溶液①100ml中。 d=1.215液：33.496gKBr溶于溶液①100ml中。 以上溶液的密度，必要时用折射仪检测。 [b]2．操作[/b] 取10mlEDTA Na[XB]2[/XB]抗凝（1mg/ml）采血，离心（3000r/min）10min，分离得血浆。取血浆4ml加入容量10ml的超离心管中的底层，上面铺盖2ml溶液①(d=1.006)液，20kr/min(26kXg)离心30min(4℃)，不用制动器让其旋转减速，以防飘浮物与下浮层相混；取出下层4ml混合血浆待用；超离心管中残留2ml，再取溶液①2ml沿管壁加入，仔细混匀分散脂蛋白，又加溶液①2ml铺在表面，20kr/min，4℃，离心1h，取出上层液直至变界处，此即CM组份。再将第一次离心所得的下层4ml混合血浆取出，其上铺2ml溶液①，40kr/min（100k×g），18℃离心17h，取上层1ml液，此即VLDL组份。再取出1ml至交界处，弃去，将管内剩余的4ml混合液移入另一超离心管内，取2ml溶液②（d=1.182）洗出离心管中残余的脂蛋白，加入到装4ml混合液超离心管内，混匀，40kr/min，18℃，离心21h，取出上层（d=1.062）1ml混合液，此即LDL组份。继续将中间层1ml除去，残存的4ml转入到另一超离心管内，用d=1.478（溶液③）2ml洗涤原管，尔后移入4ml残存液管内，仔细混匀，40kr/min，18℃，离心41h，上层（d=1.20）部分吸出，即HDL组份。下层为VHDL（very high density Lipoprotein）与其他血浆脂蛋白。LDL与HDL分别对0.15mol/lNaCl-0.3mmol/L EDTA(pH8.0)透析，4℃保存。