一、超速离心法简介

为了研究，常需要得到脂蛋白纯品并进一步分离纯化载脂蛋白，迄至目前为止，采用密度梯度超速离心分离纯化各种脂蛋白仍是一种很好的方法。 超速离心法可分为制备型和分析型两种，根据其所用介质密度不同，可以分为等密度离心，密度梯度离心等。根据所用转头的类型不同可以分为角头、甩平头、垂直头和区带头离心法。脂蛋白分离中，采用密度梯度超速离心法较多。 离心作用是根据稳定角速度下做圆周运动的任何物质都受到一个外向的离心力F，这种力的大小取决于角速度（以弧度ω表示）和旋转半径r（以cm计算）。 F=ω[SB]2[/SB]r F常用地球引力表示，称为相对离心力（RCF）或者常用“数字×g”来表示。 RCF=ω[SB]2[/SB]r/980 在使用该公式时，这些关系需用“每min转数（r/min）”表示，这是表示离心机转动速度的普通方式。 由于（r/min）的数值可转换成弧度，利用ω=π（r/min）/30公式代入上式，得到下述换算式： RCF-（πr/min）[SB]2[/SB]×r/30[SB]2[/SB]/980=（1.119×10[SB]-5[/SB]）（r/min）[SB]2[/SB]·r 对于在离心转头中旋转的样品，估计其所受到的相对离心力需要考虑样品到旋转中心的固定距离（r）。由于转头的形状设计，离心管中从管顶主管底各点旋转中心的距离是不同的。例如在固定的角式转头中，作用于离心管顶部和底部的离心力的差别接近一倍。为了计算相对离心力的数值可用平均相对离心力（RCF[XB]平均[/XB]）来表示，即同一离心转头顶部和底部所受离心力的平均值。因此，最重要的将是确定半径（r）的数值。 形成密度梯度操作，可采用两种方法，一是利用自动形成器，此装置是在一根管道上装有两个容器，各以T型管与此管道相通，两容器分别装入轻液和重液，按比例进入混合器，并用蠕动泵将溶液注入超离心管内，形成不同密度液，加入到超离心管中，使其离心管中液体成密度梯度离心分布。二是采用手工操作，先配成不同密度溶液，人工一层层铺盖到超离心管内，使超离心管中成为不同密度梯度的溶夜。 超速离心后样品的收集可根据不同的实验条件采用下述几种方法。 （1）切割法：在固定的刀架上，将已离心好的样品管放在所要求的高度（按管内分离区带确定）用刀切断离心管，取出样品。 （2）虹吸法：用蠕动泵或吸管将样品从上至下逐层按区带吸出并分管收集。泵管或吸管注意每区带一管，不能混用。 （3）穿剌法：用针头在超速离心管底部穿一小孔，让液体从底部流出，并按区带分部收集。 分管收集到的各区带样品，可采用折光仪，测出折光系数，从表中查出相应溶液的水合密度，从而确认各组份的分布样品的水合密度。