3．PAP包埋前染色法（Pickel 等，1975）

经固定组织、应用振动切片机（Vibratome）切35～50μm厚片，或用组织铺片，以漂浮法在反应板上进行下列步骤： （1）正常羊血清（1：30PBS稀释），室温孵育30min。 （2）第一抗体（A种动物抗血清），4℃湿盒中48～72h。 （3）羊抗A种动物血清（1：100）室温30min。 （4）A种动物血清PAP复合物（1：100）室温30min。 （5）DAB·4HCl/H[XB]2[/XB]O[XB]2[/XB](0.05%/0.01%)，室温1.5min。上述每一步骤后应用PBS洗涤（5min×3次）。 （6）在解剖显微镜下检出免疫反应阳性部位，修整组织，用0.1mol/L磷酸缓冲液稀释的1%锇酸（pH7.4）后固定30min～1h。 （7）按常规电镜样品制备，脱水、包埋、超薄切片、染色观察。