2.组织切片酶标记抗体染色法
(1)1mm厚组织块,在4[SB]℃[/SB]下用固定液固定后,置于含4.5%的蔗糖PBS(0.05mol/l pH7.2),4[SB]℃[/SB]中漂洗,换数次固定液,过夜。
(2)随后,作10~40μm的冰冻切片,放入第一抗体血清作用12~18h,4℃,用含蔗糖的PBS洗数次。
(3)置于HRP标记抗体液(第二抗体)4[SB]℃[/SB]过夜。然后用4℃含蔗糖PBS反复冲洗数次。4[SB]℃[/SB]浸漂过夜。
(4)2.5%戊二醛(pH7.4磷酸缓冲液)再固定1h,4[SB]℃[/SB]用含蔗糖PBS反复冲洗去戊醛,每次5min,共洗3次。
(5)DAB-H[XB]2[/XB]O[XB]2[/XB]显色15~30min。
(6)0.05mol/l PBS冲洗3次,每次30min,再置于室温中用1%~2%锇酸固定1h,脱水、包埋、切片复染和观察。