4．PAP包埋后染色法（Ordronneau, 1982）

（1）将载有切片的镍网（或金网）在5%的H[XB]2[/XB]O[XB]2[/XB]液中蚀刻（etch）2～3min。生理盐水冲洗，滤纸吸干。 （2）正常羊血清用0.05mol/L Tris盐液（TBS）稀释成1：30，pH7.0，室温5min 。 （3）兔抗血清（第一抗体），内含1%正常羊血清，用0.05%mol/l Tris缓冲液稀释，pH7.6,4℃，48h后以Tris缓冲液洗涤。 （4）正常羊血清1：30，室温5min。 （5）羊抗兔1：10（第二抗体，0.05mol/l Tris缓冲液稀释，pH7.0），室温5min，Tris缓冲液洗涤。 （6）正常羊血清1：30，室温5min。 （7）兔PAP复合物，内含1%正常羊血清，室温3min,Tris 缓冲液洗涤。 （8）DAB—H[XB]2[/XB]O[XB]2[/XB]液显色（含H[XB]2[/XB]O[XB]2[/XB]0.01%～0.03%）,室温3min。 （9）4%的磷酸盐缓冲的锇酸溶液10～15min，蒸馏水洗涤（此步用于改善微细结构的反差），电镜观察。