一、IL-1的检测

IL-1有两种分子形式，即IL-1α和IL-2β，它们的生物学活性基本相同，均可采用生物学检测方法进行检测，若要区分IL-1α和IL-2β需用免疫学检测法。 [b]（一）细胞增殖法[/b] 1．淋巴细胞增殖法IL-1具有淋巴细胞活化因子的活性，可以协同促有丝分裂原刺激T细胞或胸腺细胞发生有丝分裂，同时IL-1可以刺激T细胞产生IL-2或其它T细胞生长因子，并使之表达相应的受体。因此用细胞增殖法检测IL-1可有直接增殖法和间接增殖法两种。 （1）直接增殖法：IL-1在促有丝分裂原存在的情况下，能够促使胸腺淋巴细胞和某些体外建株的T细胞克隆生长，因此测定这些细胞的增殖情况即可反映IL-1的活性。小鼠胸腺细胞测定法操作简单，比较常用，缺点是缺少特异性，因为IL-2亦可协同促有丝分裂原刺激胸腺细胞增殖。D10G4.1（一种小鼠T[XB]H[/XB]细胞克隆）测定法较胸腺细胞测定法的敏感性高，且D10G4.1对IL-2不敏感，因此特异性增强，缺点是需要长期饲养细胞株，该实验以[SB]3[/SB]H-TdR掺入法或MTT法检测细胞增殖情况。通常IL-1浓度越高，细胞转化能力越强，IL-1浓度低于0.05ng/ml时，细胞转化能力接近促有丝分裂原单独刺激的程度。 （2）间接增殖法：某些品系小鼠的T细胞系只有在IL-1存在的条件下才能产生IL-2，并且IL-2的产生量与IL-1的浓度成直线关系。因此可以利用IL-2依赖细胞株（如CTLL2）测定IL-2，藉以间接测定IL-1的含量。 2．成纤维细胞增殖法IL-1能刺激成纤维细胞的增殖，故可利用来源于新生儿包皮或传代的人皮肤成纤维细胞（如CRL1445）测定IL-1。国内常用小鼠成纤维细胞瘤L929细胞株。 检测原则是将生长成单层的L929细胞用胰酶消化后，配成适当浓度的细胞悬液，继将不同稀释度的待测样本与L929细胞悬液分加入96孔培养液中。一式三份，并设置阴性对照，放入37℃、5％CO[XB]2[/XB]的温箱中温育72h，在第16h时加入适量[SB]3[/SB]H-TdR，继续温育，结束后离心弃去培养上清，加入适量胰酶消化数分钟后，收集细胞测定cpm值或吸光度值。 [b]（二）其他方法[/b] 1．骨和较骨组织测定法利用IL-1可诱导胶原酶释放，破坏软骨组织的特性，用分光光度计测定软骨硫酸盐释放量，即可间接椎知IL-1量。又如IL-1能影响骨质吸收，应用放射性[SB]45[/SB]Ca通过小鼠头顶骨系统吸收可测定IL-1活性，为骨质吸收释放法。 2．PGE[XB]2[/XB]测定法IL-1作用于下丘脑，诱导脑细胞合成前列腺素E[XB]2[/XB]（PGE[XB]2[/XB]），发挥致热原作用；还能诱导原代培养或建株传代的成纤维细胞产生PGE[XB]2[/XB]，故可用放免疫技术测定PGE[XB]2[/XB]藉以间接测定IL-1。 3．放射免疫测定法本法利用受检IL-1样品与碘标记IL-1竞争性结合Sepharose4B中抗IL-1抗体结合位点的原理而设计。该法敏感性较高，且可排除样品中其它干扰因素的影响，其特点是可以区分IL-1α和IL-1β。 4．体内测定法IL-1在体内可诱导发热、引起急性期蛋白合成及影响血中铁和锌水平。实验室多利用IL-1的致热原作用加以检测。在给动物静脉注射IL-1前后，以体温的升高幅度表示IL-1的活性，或定期测定血清中某些急性期蛋白的含量，如血清淀粉样蛋白A，血清淀粉样蛋白P等。 总之，由于IL-1的生物学活性比较广泛，其检测方法亦多种多样，但每种方法均有其缺点，往往需要结合使用。T细胞增殖法简便、易行且敏感，但样品中若混有IL-2，则可协同促有丝分裂原刺激T细胞增殖，从而干扰IL-1的测定。血清中的TNF同样可以刺激成纤维细胞的增殖，也可用成纤维细胞测定法，但特异性较差。放免法可排除其它因子的干扰，但此法仅测得IL-1的抗原性，不能完全代表其生物学活性。