六、细菌内毒素检查方法

（一）概述 本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集的反应机理，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。 细菌内毒素标准品系自大肠杆菌提取精制得到内毒素。以细菌内毒素国际标准品为基准物，以过协作标定，使标准品单位与国际标准品单位含义一致。用于标定细菌内毒素工作标准品和促裁鲎试剂灵敏度。 细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素标准品为基准物进行标定，确定基重量的相当效价。每1mg工作标准品效价应不小于2EU，不大于50EU，并具备均一性和稳定性的实验数据。效价测定方法如下：每批工作标准品至少取4支样品，使用同一批号鲎试剂、同1支标准品。每支工作标准品按重量、标准品按单位，分别用内毒素检查用水[SB]＊[/SB]稀释制备一系列2倍稀释度的内毒素溶液，与鲎试剂反应，当4支工作标准品的反应终点的对数均值的标准差（S）小于0.365时，计算4支工作标准品的反应终点的几何平均值（以ng/mg表示）及标准品的反应终点值以（以EU／mg表示），按下式计算。 [img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/yiyuanyaoxue/yiyuanyaoxue105.jpg[alt][/alt][/img] （二）试验准备 本法所用的器皿需经处理，除去可能存在的外源性内毒素常用250℃干烤30分钟或180℃干烤2小时，也可用其他适宜方法。试验操作过程应防止微生物的污染。 试验前需核对使用批号鲎试剂的灵敏度标示值，应符合规定。装量加入配带的鲎试剂溶剂。溶解后，为鲎试剂溶液，备用。 供试品的稀释：使用批号鲎试剂的灵敏度标示值小于供试品的内毒限量时，按下式计算，用内毒素检查用水[SB]＊[/SB]将供试剂品稀释后进行检查。 供试品的稀释倍数＝X／λ X：供试品的内毒素限量内毒素限量（EU／ml） λ：供试品鲎度剂灵敏度标示值（EU／ml） (三)检查 装有0.1ml鲎试剂溶液的10×75mm试管（或0.1ml／支规格的鲎试剂原安瓿）4支，其中2支加入0.1ml供试品作为试品管，1支加入2λ内毒素工作标准品0.1ml作为阳性对照管，1支加入配带的鲎试剂溶液0.1ml作为阴性对照管。将试管轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37±1℃水浴中，保温60±2分钟。保温过程和拿取试管要小心，避免因受到振动造成阴性结果。 （四）结果判断 将试管从水浴中轻轻取出，缓缓倒转180[SB]0[/SB]时，管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性记录为（＋）凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（一）。供试品2管如为（一），应认为符合规定，不再进行热原检查法（家兔法）试验。如2管均为（＋），应认为不符合规定。如2管中1管为（＋），1管为（一），按述方法另取4支供试品管复试，4管中有1管为（＋）即认为不符合规定。除正文另有规定外，有符合规定的供试品应再以热原检查法（家兔法）试验，并根据的结果判定。 供试品细菌内毒素的限量应符合各品种正文下的规定。 阳性对照为（一）或阴性对照为（＋），试验无效。 附 灭菌注射用水、注射用水、氯化钠注射液、5％和10％葡萄糖注射液细菌内毒素检查。 【细菌内毒素】取本品，依法检查，供试品细菌内毒素的限量不应超过1EU／ml。如超过1EU／ml，需经热原检查法（家兔法）判定。