二、血清脂蛋白琼脂糖电泳法

[b]（一）原理[/b] 以琼脂糖凝胶为支持介质，先用脂类染料将血清进行预染，使血清脂蛋白着色，然后电泳。切下各脂蛋白区带，加热溶解，冷却后比色。或者用光密度计直接扫描仪定各区带。计算出α、β-和前β-脂蛋白的相对百分比。 [b]（二）试剂[/b] 1．巴比妥HCl缓冲液（pH8.6，离子强度0.075）：称取巴比妥钠15.5g，加入1mol/LHCl12ml，混匀溶解，加蒸馏水至1000ml，此为电极缓冲液。 2．巴比妥-HCl缓冲液（pH8.6,离子强度0.05）：称取巴比妥钠10.3g,加入1mol/LHCI8ml，混匀溶解，加蒸馏水至1000ml，用于配琼脂糖凝胶用。 3．0.8%琼脂糖凝胶：取琼脂糖0.8g，溶于配琼脂糖凝胶的缓冲液100ml，置沸水煮溶或置于微波炉中热溶解。 4．1%苏丹黑B的石油醚-乙醇（1：4，V/V）溶液。 [b]（三）操作[/b] 1．预染血清：吸血清0.2ml于一小试管中，再加苏丹黑B染色液0.02ml及无水乙醇0.01ml。混匀后置于37℃水溶预染20min。取出各管，2000r/min离心5min，以除去多余的染料。 2．琼脂糖凝胶板制备：将0.8%琼脂糖凝胶溶解后，吸2.5ml到载玻片上，趁热将刻点样槽用有机玻璃盖放在距载玻片一侧近1cm处。一块载玻片前后可打两个槽点两份样品。 3．点样与电泳：取下凝胶上有机玻璃盖并显出一加样小槽。取预染血清40μl，注入此小槽中。在电泳槽内加入巴比妥电极缓冲液，样品端为负极。以四层滤纸或沙布搭桥按10V/cm电泳，待预染血清电泳至最高或40min，切断电源。 4．定量： （1）切割比色法：将凝胶板上各脂蛋色带分别切开置于装入有3ml蒸馏水的试管内。切相应大小的空白琼脂糖放入3ml蒸馏水试管内，为空白管，各管放入沸水煮3min，琼脂糖溶解，待冷，以空白管调零点，于660nm处比色，记录吸光度，以α-、前β-和β-脂蛋白三条区带吸光度总和，比各自区带的吸光度，求其百分比。这种半定量方法不够准确，误差很大。 （2）扫描定量：预染脂蛋白琼脂糖凝胶电泳毕，其琼脂糖凝胶板上有色带，可直接置于光密度扫描仪扫描，并得出各区带的百分比，如果输入该病人的血脂总量，即可算出α-、前β-和β-脂蛋白的各自含量，如图16-2所示。 [img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/dongmaizhouyangyinghua/dongmaizhouyangyinghua113.jpg[alt]血清脂蛋白电泳（琼脂糖）[/alt][/img] 图16-2 血清脂蛋白电泳（琼脂糖） 正常参考值（百分比）： α-脂蛋白 25.7±4.1% 前β-脂蛋白 21.0±4.4% β-脂蛋白 53.3±5.3% 注意事项：①血清样品要新鲜；②为了免去离心步骤，吸取预染血清时，应吸取上层，下层或管底可能有染料颗粒沉渣，否则应再离心后吸预染血清。