二、酶法

1.原理 磷脂酶D因特异性不高,能水解血清中卵磷脂,溶血卵磷脂和神经磷脂(三者占血清总磷脂的95%),释放出胆碱,胆碱在胆碱氧化酶作用下生成甜菜碱和H[XB]2[/XB]O[XB]2[/XB],在过氧化物酶作用下,H[XB]2[/XB]O[XB]2[/XB],4-氨基安替比林、酚发生反应生成红色醌亚胺化合物,其颜色深浅与这三种磷脂的含量成正比,在500nm波长下比色计算结果为: 2.试剂 (1)酶应用液(参考配方):每100mlTris-His缓冲液(50mmol/L,pH7.8)中含:
磷脂酶D45U
胆碱氧化酶100U
过氧化物酶220U
4-氨基安替比林12mg
20mg
CaCl[XB]2[/XB]·2H[XB]2[/XB]O8mg
TritonX-1000.2g
(2)标准液:纯卵磷脂,临用前配制,5mg/2.5ml蒸馏水(含TritonX-1000.5%) 3.操作 (1)标本采集:空腹12h抽静脉血,不抗凝,分离血清或抗凝血分离血浆。 (2)在3.0ml酶应用液中加入血清(浆)20μl,标准管加标准液20μl,空白管加水20μl,放置37℃水浴10min后,波长500nm,比色,空白管液调零。 4.计算 血清磷脂(mg/dl)=TA/SA×200 血清磷脂(mmol/L)=血清磷脂(mg/dl)×0.01292