二、酶法（CEH、COD-POD法）

首先将血清中胆固醇酯在胆固醇酯酶（CEH）水解为游离胆固醇和脂肪酸，胆固醇在胆固醇氧化酶（COD）作用下，生成△4-胆甾烯酮和H[XB]2[/XB]O[XB]2[/XB]，再H[XB]2[/XB]O[XB]2[/XB]经过氧化物酶（POD）作用在4-氨基安替比林（4-AA-P）及N-乙基-N-（3-磺基醋酸）-3甲氧基苯胺（N-ethyl-N-(3-sulfopropyl)-manisidine,ESPAS）参与下，生成红色醌亚胺色素。 [img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/dongmaizhouyangyinghua/dongmaizhouyangyinghua097.jpg[alt][/alt][/img] H[XB]2[/XB]O[XB]2[/XB]+ESPAS+4-氨基安替比林→红色醌亚胺色素 [b]（一）手工测定法[/b] 1．试剂组成

代号	种类	浓度	组成	贮2～8℃	有效时间
	Na[XB]2[/XB]HPO[XB]4[/XB]	50mmol/L
	Na[XB]2[/XB]H[XB]2[/XB]PO[XB]4[/XB]	50mmol/L
	胆酸钠	3mmol/L
	4-氨基安替比林	0.82mmol/L
R1*	ESPAS	14mmol/L			24h
	Carbowax-6000	0.17mmol/L
	CEH	33U/L
	COD	117U/L
	POD	6700U/L
R2	标准液	5.17mmol/L	用异丙醇溶解胆固醇

*混匀，调pH至6.70±0.10(25℃)，或购买试剂盒。酶以活性单位表示。 2．操作 按图15-2操作。 3．计算 标准总胆固醇浓度=E[XB]SA[/XB]/E[XB]ST[/XB]×5.17(mmol/L) [b]（二）自动化分析仪测定[/b] 以CL-7200型全自动生化分析仪检测为例。 1．试剂组成 A液：CEH、POD、抗坏血酸氧化酶等。 B液：COD、4-氨基安替比林等。 [img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/dongmaizhouyangyinghua/dongmaizhouyangyinghua098.jpg[alt]血清胆固醇测定（酶法）操作图[/alt][/img] 图15-2 血清胆固醇测定（酶法）操作图 2．上机参数

项　目	参　数
方　法	终点法
波　长	双波长（540nm，700nm）
反应温度	37℃
试剂A反应时间	2～3min
试剂B反应时间	5～6min
样本用量	3μl
试剂A用量	250μl
试剂B用量	120μl
单位	mmol/L

3．操作过程 [img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/dongmaizhouyangyinghua/dongmaizhouyangyinghua099.jpg[alt]自动化分析仪测定操作过程[/alt][/img] 4．计算 以△A=A2-A1，根据同样处理之标准或质控物计算，打印结果。 5．注意事项 （1）试剂与样本量可根据分析仪要求按比例改变。 （2）试剂在有效内2～8℃避光食保存。 （3）胆固醇含量超过200mmol/L，需用生理盐水稀释再测。