抑制幽门螺杆菌中药的筛选

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)于1983年由Warren和Marshal首次从胃粘膜活检标本中分离并命名。越来越多的证据支持Hp是胃炎的致病菌,Hp感染与消化性溃疡的发病也密切相关。中医药治疗慢性胃炎及消化性溃疡取得了良好效果,为进一步提高疗效,探讨其机理,我们从不同性味,不同作用的200种中药中作初步筛选,发现其中38种中药对Hp有抑菌作用。现将结果报道如下。 [b]1 材料和方法[/b] 1.1 Hp培养鉴定 患者因上消化道症状行胃镜检查226例,并诊断为慢性胃炎或消化性溃疡。其中男175例,女51例,年龄16岁~70岁,平均39.1岁,病程3月~2a。本组病例排除了肝、肾和血液系统疾病。胃镜检查前1周,患者未用抗生素,铋剂和影响胃酸分泌的药物。Olympus胃镜及活检钳均用2%戊二醛浸泡消毒15min,使用前用清水冲洗。选慢性胃炎和消化性溃疡患者,用19K活检钳在胃窦部距幽门5cm范围内取胃粘膜标本2块,以无菌手续接种在改良Skirrow培养基(含万古霉素10mg/L、多粘素B2500IU/L、TMP5mg/L)。培养基放在10%CO[XB]2[/XB]、5%O[XB]2[/XB]和85%N[XB]2[/XB]条件下,37℃培养72h。226例均作了Hp培养。Hp菌落为半透明、灰色、湿润、稍隆起圆形。菌体革兰染色阴性,呈弯曲,“S”形或“海鸥”形。生化鉴定:尿素酶阳性,氧化酶阳性,在三糖铁培养基上不发酵。不产H[XB]2[/XB]S,醋酸铅试纸法H[XB]2[/XB]S(+),对1%甘氨酸部分耐受,不还原硝酸盐,不水解马尿酸。 1.2 山药抑菌试验 中药煎液制备 将单味中药分别浸泡,于烧杯中60min,在100℃条件下煎煮30min,取1:1(1g中药煎出1ml药液)煎液存放于无菌试管备用。 抑菌试验材料 改良Skirrow培养基,Hp悬液(10[SB]8[/SB]/ml),无菌海绵块(圆形,厚2.5mm,直径6.5mm,吸液量30μl/块),中药煎液,5%NaCl。方法:将Hp悬液均匀接种在改良Skirrow培养基上,用海绵块吸取中药液分别放置于上述培养基,5%NaCL未出现抑菌环,无抑制Hp作用。其抑菌环的大小,显示出不同中药对Hp的不同抑菌程度,结果见表1。 表1 中药对Hp抑菌结果
药名抑菌环(mm)药名抑菌环(mm)药名抑菌环(mm)药名抑菌环(mm)
黄 芩25山 楂22槟 榔16旱莲草12
黄 连25厚 朴20五味子16麦 冬12
大 黄24枳 实19生黄芪15元 胡12
黄 柏24白 芍19艾 叶15苍 术11
桂 枝23香 附17没 药15女贞子10
地 丁23青天葵17毕 菝15川楝子10
玫瑰花23地 榆17草豆蔻15黄 精9
土茯苓23连 翘17瓜 蒌15生侧柏9
高良姜22茵 陈16远 志145%Nacl0
乌 梅22苦 参16金樱子14  
[b]2 讨论[/b] Hp感染与慢性胃炎及消化性溃疡的关系越来越受到重视。本组226例中60.2%检出Hp,与文献报道接近。多年来国内用中医药辨证治疗胃炎和消化性溃疡取得了良好效果,为探讨Hp这一致病因素与中药治疗胃胃及消化性溃疡间的作用,我们做了常用中药对Hp的抑菌实验,中药均选自不同性味、不同作用的单味药。在200种药中筛选出38种有不同大小的抑菌环出现,说明有抑菌作用。5%NaCl作为高渗透压作用的对照表明,未见抑菌环出现,无抑菌作用,故可排除中药煎剂可能产生的高渗透压作用而出现假性抑制Hp生长作用。 经体外实验初步筛选的38种中药对Hp有抑菌作用,其中以黄芩、大黄、黄柏、桂枝、地丁、玫瑰花、土茯苓、高良姜、乌梅、山楂等抑菌作用最明显,最大抑菌环为25mm。张琳等曾用牛津杯法其实验结果见黄连抑菌作用明显,我们所作结果与之相符。但其所见黄连抑菌环达41mm,可能与实验条件、方法等不同有关。我们所见党参、枸杞子对Hp无明显抑菌作用,与之报道不符;我们所见土茯芩、玫瑰花、高良姜等抑蓖作用明显,但尚未见报道。 临床实践中,我们体会到选用对Hp有良好抑菌作用的中药综合辨证论治组方,对于患者临床症状的减轻和消除,病理组织学的改善均有良好的促进作用。梁方信等报道Hp阳性的胃病51例后,66.7%Hp仍为阳性,而94.1%患者可达到组织学康复或好转。我们在临床中亦发现有相同的一些病例,但对这部分Hp阳性,无临床症状,胃镜下所见及病理组织学查检已见有明显好转的患者继续治疗,则发现Hp仍可转为阴性。因此,我们考虑Hp感染只不过为胃炎、消化性溃疡的致病因素之一。中医药治疗疾病确有其独到之处,在注重局部病变的同时,更注重整体的调节。所以,对于慢性胃炎和消化性溃疡的治疗,Hp应受到重视,但更应切记辨证论治原则。 本结果为阳性胃炎和消化性溃疡的治疗提供了针对Hp感染的用药依据,而复方制剂与不同剂型的中药对Hp的清除作用,目前仍在进一步实验研究中。