抗幽门螺杆菌抗体检测标准系统的应用

由于幽门螺杆菌（H.pylori，Hp）人群感染率高，在正常人群中往往也存在一定的抗Hp抗体滴度，在抗体测定中因选择的阴性参考血清不同，各检验单位间的资料没有可比性，同时也不利于病人抗Hp治疗后对其抗体滴度变化的观察。本实验在大量人群资料和实验室资料的基础上，确定了抗Hp尿素酶抗体检测中的阳性判断界值，建立了此抗体检测标准系统，完成了标准阳性血清中特异性抗Hp尿素酶抗体的定量工作。 [b]1　材料和方法[/b] 1.1　材料 抗Hp抗体阳性及阴性血清各50份，经实验室酶联免疫吸附实验（ELISA）和免疫印迹分析（Western blots）证实。10736份其它血清采自北京和河南的四个人群现场。Hp尿素酶抗原（HpU）由本实验室分离纯化。酶标板采用美国Linbro/Titertek酶标板。IgG标准品购自百泰生物技术公司，为日本北里研究所产品，IgG含量为15.5g/L。参考血清由多份抗Hp抗体阳笥血清混合而成。 1.2　方法 ①用6μgHpU/孔包被酶标板。用常规ELISA方法测定各血血中的抗Hp抗体，用Linbro/Titertek酶标仪读取各孔吸光度（A）[旧称光密度（OD）下同]，用参考血清作板间校正后，用Foxpo及EPI软件对结果进行分析处理，确定血清抗Hp菌IgG抗体检测结果与临床Hp感染的高符后率判断界值。②用100～0.001μgIgG标准品/孔不同浓度包被酶标板（每种浓度包被3孔），用ILISA方法测定IgG标准品的结合量，观察IgG标准品可全部结合时的适宜包被浓度用IgG标准品被量与吸光度（A）间存在线性关系的范围。③用过量抗原（300μgHpU/孔）包被酶标板，将能考血清按1：20～1280倍比稀释后，用常规ELISA方法测定各稀释血清中的抗HpU抗体（每滴度测定6孔），用Linbro/Titertek酶标仪读取各孔吸光度（A），绘制不同滴度与吸光度（A）间存在线性关系的范围内，采用三点计算参考血清中抗HpU特异性抗体的含量，并按其均值推算标准阳性血清中特异性抗HpU抗体的含量。 [b]2　结果[/b] 统计结果显示，用参考血清及吸光度（A）的0.77倍[即将参考血清稀释3.74倍时的吸光度（A）]作为判断待测血清的阳性标准时，达到最高的检测符合率，此时对100份抗幽门螺杆菌抗体阳性及阴性血清的检测符合率为100％。 IgG标准品可全部结合时的适宜包被浓度为≤0.2μgIgG标准品/孔，IgG标准品包被量与吸光度（A）间存在线性关系的范围为包被浓度为0.2～0.01μgIgG标准品/孔。 在IgG标准品包被量与吸光度（A）间存在线性关径流的范围内，采用三点进行参考血清HpU特异性抗体的含量测定结果分别为239、248和248μg /ml，平均245μg/ml。依此计算得出标准阳性血清中特异性抗HpU抗体的含量为66μg/ml。 [b]3　讨论[/b] 本实验在大量人群资料和实验资料的基础上，建立了抗体幽门螺杆菌血清抗体诊断标准，并在国内抗幽门螺杆菌素酶抗体检测中首次采用判断界值技术，完成了标准阳性血清中特异性抗幽门螺杆菌尿素酶抗体的定量工作，不但使检验过程更加稳定，使各检验单位的资料具有可比性，也使基层单位应用目测判断结果也能达到检验要求。此标准系统用于慢性胃炎和消化性溃疡的协助诊断及流行病学调查，在北京天坛医院、友谊医院、北京肿瘤研究所、首都儿科研究所及广东、江西、河北、内蒙、河南等地的应用取得了良好的效果。