三、免疫球蛋白的分类鉴定
疑为丙种球蛋白病的患者，经血清蛋白区带电泳和免疫球蛋白测定，已基本证实是否有免疫球蛋白的异常增高和其含量的多少，但是增高的M蛋白究竟是哪一类免疫球蛋白，仍需进一步分类鉴定，常应用各种类型的特异性抗血清，做不同形式的电泳或免疫扩散。
[b]（一）免疫电泳[/b]
免疫电泳是将区带电泳和免疫扩散结合起来的一种免疫学分析法。血清标本先经区带电泳将各种蛋白成分分离开，继而用各种特异性抗血清进行免疫扩散，根据M蛋白在免疫电泳中所形成的特殊沉淀弧，观察其电泳迁移位置与抗原特异性，可将M蛋白的免疫球蛋白类型和其轻链型加以鉴定。一般多用抗IgG、IgM、IgA、κ和λ轻链等5种抗血清进行实验，用抗正常人血清作为对照。M蛋白与相应抗体发生反应所出现的沉淀弧较为特殊，较普通沉淀弧宽，凸出呈弓形，不难辨认。如有下列情况，可作出判断或提示。
1．如果待测血清标本与某型免疫球蛋白重链及轻链抗血清产生相同迁移度的特殊沉淀弧，提示存在单克隆丙种球蛋白（M蛋白），此现象多见于IgG、IgA或IgM型多发性骨髓瘤或原发性巨蛋白血症等（图26-2）。
[img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/mianyixuehemianyixuejianyan/mianyixuehemianyixuejianyan130.jpg[alt]IgAλ型骨髓瘤的免疫电泳图谱[/alt][/img]
图26-2 IgAλ型骨髓瘤的免疫电泳图谱
孔中为血清标本，槽中为抗血清，箭头所指为骨髓瘤蛋白
a：抗正常人血清；b：抗IgG血清；c：抗IgA血清；
d：抗IgM血清；e：抗κ血清；f：抗λ血清
2．在同一抗轻链血清的反应中，同时出现二条毗邻的特殊沉淀弧（图26-3），则可能是除M蛋白以外还存在游离轻链，偶尔也可见两种M蛋白，此时应进一步测定尿中的本周蛋白。
3．患者血清中仅与其中一种抗轻链抗血清产生一种特殊的沉淀弧，而其他5种抗重链抗血清均不产生此种特殊的沉淀弧，这种情况可能是①伴有肾功能不全的轻链病，游离轻链较少从尿中排出而滞留于血液中；②存在轻链的四分子多聚体，分子量大（90kD），不易从尿中排出，而留存于血液中；③尚未发现的新重链的免疫球蛋白。
[img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/mianyixuehemianyixuejianyan/mianyixuehemianyixuejianyan131.jpg[alt]IgGκ型骨髓瘤伴κ型本周蛋白尿的免疫电泳图谱[/alt][/img]
图26-3I gGκ型骨髓瘤伴κ型本周蛋白尿的免疫电泳图谱
上孔为尿液，下孔中为血清标本，槽中为抗血清，箭头所指为骨髓瘤蛋白b：
抗IgG血清；c：抗IgA血清；d：抗IgM血清；e：抗κ血清；f：抗λ血清
[img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/mianyixuehemianyixuejianyan/mianyixuehemianyixuejianyan132.jpg[alt]IgG重链病的免疫电泳图谱[/alt][/img]
图26-4 IgG重链病的免疫电泳图谱
上孔中为尿液，下孔中为血清，槽中为抗血清，
箭头所指为骨髓瘤蛋白a：抗正常人血清；b：抗IgG血清；c：抗
IgA血清；d：抗IgM血清；e：抗κ血清；f：抗λ血清
4．若患者血清只与IgG、IgA或IgM中的一种抗重链血清产生一特殊沉淀弧，但在两型抗轻链血清中无相应位置的沉淀弧出现，血清标本经2-巯基乙醇还原处理后，仍无改变，提示可能是重链病（图26-4），需进一步测定其分子量。
5．非分泌型丙种球蛋白病血清中某一类型的免疫球蛋白含量一般不会太高，沉淀弧带偏近抗体槽，以致影响分析。必要时需对血清标本进行不同稀释后再作试验，以资比较。有时某些M蛋白（如IgA或IgM）的四级结构会阻碍轻链抗原决定簇与其相应抗血清结合，因而误诊为重链病。这时需在血清标本中加入2-巯基乙醇（10μl/ml血清）作还原处理后再作试验，才能获得正确结果。作游离轻链分析时，由于轻链分子量小，扩散很快，要每隔10min观察一次结果，并注意标本浓度不宜过高，否则难以获得满意结果。
如果免疫电泳仍不能完全进行M蛋白的分类鉴定，可应用免疫选择电泳与免疫固定电泳作为补充，以便进一步鉴定。
[b]（二）免疫选择电泳[/b]
将含抗κ或λ血清的琼脂制成薄层琼脂板，打孔后加入待测血清或其他标本进行火箭电泳，与标本相应的免疫球蛋白形成火箭样沉淀峰。然后于孔的两侧各挖一槽，加入某型免疫球蛋白的抗血清或另一型轻链抗血清，温育扩散后，按沉淀弧形成的情况，进行分析鉴定。图26-5为α重链病和IgA骨髓瘤的结果。
[img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/mianyixuehemianyixuejianyan/mianyixuehemianyixuejianyan133.jpg[alt]免疫选择电泳图谱[/alt][/img]
图26-5 免疫选择电泳图谱示例孔中为血清标本，槽中为抗IgA重链抗血清KL表示琼脂中含抗κ及抗λ抗血清
A：正常人；B：α重链病；C：IgA骨髓瘤
[img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/mianyixuehemianyixuejianyan/mianyixuehemianyixuejianyan134.jpg[alt]免疫固定电泳图谱[/alt][/img]
图26-6 免疫固定电泳图谱示例（IgA-λ型M蛋白）
κ、λ、G、A、M分别代表覆盖含抗κ，抗λ，抗IgG，
抗IgA和抗IgM的抗血清；箭头所指为加样处
[b]（三）免疫固定电泳[/b]
该方法类似免疫电泳，将待测血清或其他标本在琼脂平板上作区带电泳，分离后于其上覆盖含抗κ或λ轻链或各类重链的抗血清滤纸，当抗体与某区带中的单克隆免疫球蛋白结合后，便形成复合物而沉淀下来，再通过漂洗与染色，呈现浓而狭窄的着色区带，即可判断单克隆丙种球蛋白的轻链和重链型别（图26-6）。
