三、火箭免疫电泳

火箭免疫电泳技术又称作单向电泳扩散免疫沉淀试验，它是由单向扩散发展起来的一项定量技术，实质上是加速度的单向扩散。在含抗体的琼脂板一端打一排抗原孔；加入待测标本后，将抗原置阴极端，用横距2～3mA/cm的电流强度进行电泳。抗原泳向阳极，在抗原抗体比例恰当处发生结合沉淀。随着泳动抗原的减少，沉淀逐渐减少，形成峰状的沉淀区，状似火箭（图12-11）。抗体浓度保持不变，峰的高度与抗原量呈正比，用标本中的抗原含量。 [img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/mianyixuehemianyixuejianyan/mianyixuehemianyixuejianyan058.jpg[alt]火箭电泳图[/alt][/img] 图12-11火箭电泳图 ①②③为标本；④⑤⑥为标准抗原 火箭电泳操作时应注意以下几点： 1．所用琼脂可选择无电渗或电渗很小的，否则火箭形状不规则。 2．注意电泳终点时间，如火箭电泳顶部呈不清晰的云雾状或圆形皆提示未达终点。 3．标本数量多时，电泳板应先置电泳槽上，搭桥并开启电源（电流要小）后再加样。否则易形成宽底峰形，使定量不准。 4．作IgG定量时，由于抗原和抗体的性质相同，火箭峰因电渗呈纺缍状。为了纠正这种现象，可用甲醛与IgG上的氨基结合（甲酰化），使本来带两性电荷的IgG变为只带电荷，加快了电泳速度，抵消了电渗作用，而出现伸向阳极的火箭峰。 火箭电泳作为抗原定量只能测定μg/ml以上的含量，如低于此水平则难于形成可见的沉淀峰。加入少量[SB]125[/SB]I标记的标准抗原共同电泳，则可在含抗体的琼脂中形成不可见的放射自显影技术。根据自显影火箭峰降低的程度（竞争法）可计算出抗原的浓度。放射免疫自显影技术可测出ng/ml的抗原浓度。