核糖含量测定

[b]1 试剂[/b] 1.1 0.31mol /L 三氯醋酸 称取三氯醋酸5g,加蒸馏水溶解成100ml。 1.2 0.61 mol /L三氯醋酸 称取三氯醋酸10g,加蒸馏水溶解成100ml。 1.3 0.019mol /L 三氯化铁-盐酸溶液 称取三氯化铁(FeCl3·6H2O)0.5g,加浓盐酸溶解成500ml,可长期使用。 1.4 1%二羟基甲苯(苔黑酚) 称取二羟基甲苯1g,溶于0.019mol /L 三氯化铁-盐酸溶液中,临用新配。 1.5 标准核糖溶液 精密称取D核糖20mg,溶于0.31mol /L 三氯醋酸,准确稀释至100ml为200μg /ml核糖标准贮备液。精密吸取贮备液2.5ml于25ml容量瓶中,用0.31mol /L 三氯醋酸稀释至刻度,即为标准核糖溶液(20μg/ml)。 [b]2 操作[/b] 精密量取转移因子待检品1ml于试管中,另0.61mol /L三氯醋酸1ml,置沸水浴水解15分钟,再吸取水解液0.4ml,加0.31ml/L三氯醋酸1.6ml,及1%二羟基甲苯2ml,混匀,再置沸水浴中加热30分钟,冷却至室温,在650nm波长测定OD值,同时准确吸取核糖标准液1ml,加0.31mol/L三氯醋酸1ml,混匀,其余操作同样品,并做空白对照。 [b]3 计算[/b] 样品OD值 核糖含量(μg/ml)= ─────×20×5 标准OD值