四、粘连蛋白的提取

提取粘连蛋白的基本原理是用NaCl脱氧胆酸钠液提取血管壁中的粘连蛋白，再用高盐除去杂质，然后进一步用Sephacryl层析纯化，方法如下： 1．将动脉血管壁组织加10倍体积处理液（0.05mol/lTris-HCL pH7.6、0.5%核酸酶），4℃搅拌20min，10kr/min离心10min。 2．沉淀用含0.05mol/L Tris-HCl pH7.6、0.5%PMSF、10%甲醇液，洗涤2次，10kr/min离心10min。 3．沉淀物中，加40倍体积处理液（0.05mol/lTris-HCl pH7.6、0.5%PMSF、0.5mol/LNaCl,）4℃过夜后，10kr/min离心10min。 4．上清用PEG6000浓缩，最后加入已平衡好的SephacrylS-3000层析柱上，用0.05mol/L Tris-HCl pH7.6、0.5%NaCl洗脱，第一峰即为粘连蛋白。