第一节　受体与标记配体的结合分析

为了体外研究脂蛋白的细胞代谢和脂蛋白受体活性，早在1974年Goldstein和Brown就建立了成纤维细胞[SB]125[/SB]I标记LDL的配体-受体结合分析法。其基本原理是：用放射性同位素（常用[SB]125[/SB]I）标记LDL后，与细胞（通常为培养的单层成纤维细胞）、组织或含有LDL-R的制剂一起孵育，使LDL-R与[SB]125[/SB]I-LDL充分结合，形成受体-配体复合物，再除去未结合的[SB]125[/SB]I-LDL，测定结合沉淀物中的放射性。同时检测细胞、组织或受体制剂的蛋白质含量，即可计算出与[SB]125[/SB]I-LDL结合的LDL-R量。本法由于使用同位素，采样困难和操作过程繁琐，且费时、昂贵，故在临床诊断上难以广泛开展。 Teupser等于1996年建立了直接荧光法检测LDL-R，他们采用1，1’二（十八烷基）-3，3'，3'，3'-四甲基吲哚羰基花青高氯酸盐（1,1'-dioctadecy1-3,3,3'，3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate,DiI）标记LDL，原理与同位素标记LDL相同。其操作步骤见图20-1。直接荧光法可定量检测附着的或非附着的各种类型的培养细胞（如正常人或FH病人的皮肤成纤维细胞、淋巴细胞、人U-937和鼠P388D1巨噬细胞系）的LDL-R和清道夫受体，其特点是特异性强，灵敏度高，不使用有机溶剂、不需预先进行脂质抽提，并省去了多步抽提步骤。正常人平均最大结合浓度为10.3±1.1μg/mg细胞蛋白，FH杂合子为5.2±0.8μg/mg细胞蛋白，FH纯合子0.9±0.2μg/mg细胞蛋白。 [img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/dongmaizhouyangyinghua/dongmaizhouyangyinghua157.jpg[alt]直接荧光法测LDL-R操作步骤[/alt][/img] 图20-1 直接荧光法测LDL-R操作步骤 亦有用胶体金标记LDL的，但是在受体-配体结合分析法中，正常人与FH患者的测定值有较明显的交叉现象，且操作比较繁琐。 1987年Roach等比较了在硝化纤维素上用[SB]125[/SB]I-LDL、生物素-LDL、生物素-LDL、胶体金-LDL和胶体金-LDL结合银染四种方法检测LDL-R，发现胶体金-LDL结合银染的方法最为敏感，且安全、简单、快速、便宜。比较结果见表20-1。 表20-1 硝化纤维上检测LDL-R的几种方法比较

因素	[SB]125[/SB]I-LDL	生物素-LDL	胶体金-LDL	胶体金-LDL加银染
时间	12～24h	3h	5～10min	20min
敏感性	1.6fmoles	1.6fmoles	1.6fmoles	193amoles
线性范围	0.5～15μg	0.5～4μg	0.5～4μg	0.06～2μg