一、载脂蛋白测定方法
1．单向免疫扩散法（radialimmunodiffusion,RID）
该法较简单，一般实验室均可进行。消耗较多的抗血清，扩散过程至少24h，最多需72h，测定下限值为10μg/ml。该方法虽然简单，应严格控制有关条件如：含抗血清的琼脂糖凝胶厚度要均匀；加入小孔的稀释抗原（血清）量要准确；含ApoB的脂蛋白如VLDL和LDL颗粒大小不一，如琼脂糖凝胶浓度在1.5%～2.0%,可能仅测出LDL的ApoB，大颗粒的LDL及VLDL的ApoB可能无法测出，因为难以穿过琼脂糖凝胶的孔隙。另外，扩散过程中，凝胶板一定要水平，否则易使扩散环呈椭圆形，难以准确测量直径。一般使沉淀环以3.5～10.0mm为宜，应在两个方向测量直径，其精度要求达到0.1mm。采用五种不同浓度参考值，测定沉淀环面积对相应浓度关系以曲线回归方程作图。
2．电免疫测定法（electroimmunoassay,EIA）
该法灵敏，抗血清用量少，如琼脂糖缓冲液中加入聚乙二醇及甘氨酸，其电泳时间可缩短一倍，火箭峰高以1～4cm为宜，火箭峰的测量可以计算面积或峰高，峰高从中心量起。测量精度最好能在0.1mm,灵敏度约2μg/ml，又称为火箭电泳法。
3．免疫比浊法(immunoturbidimetryassay,ITA）
简便快速，在自动分析仪进行操作并能批量检测，是目前临床使用最多的方法学。免疫比浊法有两种：一是测定光散射的，又名免疫散射比浊法（INA）；需用特殊的激光浊度仪；另一种是利用光度计测定通过混浊溶液后的透光强度，称为透射免疫比浊法（ITA），其灵敏度低于INA。比浊法可以终点法和速率法测定，速率法是根据散射光强度与时间的关系，以微机处理计算出抗原抗体复合物形成的最大反应速度，后者与溶液中抗原量成正比，常可在1min内完成测定过程，可自动扣除空白；终点法比速率法稳定，一般多用终点法。
4．酶联免疫法（enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA）
该技术已广泛应用于极微量蛋白的定量测定，可测出ng级水平的抗原或抗体含量，该法可用于ApoE、C-Ⅱ、C-Ⅲ等含量较少的载脂蛋白的定量测定。
5．放射免疫法（radioimmunoassay,RIA）
该法灵敏，抗血清用量少，所需设备较多，一般用[SB]125[/SB]I标记抗原作为示踪物，除ApoC-Ⅰ（不含酪氨酸）以外，都可以作碘标记（氯胺T法），以双抗体法测定RIA法可检测最低至3～5ng。临床检验中不常用此法，主要用于动物实验的科学研究工作。
还有荧光免疫法和化学发光法等灵敏度很高的方法。
血清载脂蛋白测定的方法，从测定原理、方法学评价及参考值，刘秉文和李健斋等人作了大量的工作，为国内的载脂蛋白测定的临床应用奠定了基础。周新曾于1986年首先在国内研制成功抗人ApoB[XB]100[/XB]血清，其后，国内同仁陆续研制出ApoAⅠ、AⅡ、AⅣ、E、CⅡ、CⅢ抗血清，并广泛应用于临床的疾病诊断，在部分大医院已成为常规检查项目。
刘秉文在“脂蛋白与动脉粥样硬化“一书中全面总结了国内外载脂蛋白测定的方法学及其参考值，本节将引用如下比较表：
表18-1 ApoAⅠ免疫测定法的比较
| | RIA | ELISA | EIA | RID | INA | ITA |
| 抗体 | P，M | P，M | P | P，M | P | P |
| 灵敏度（n） | 0.3～10 | 0.1～0.5 | 100 | 100 | 150 | 100 |
| 测定范围（ng） | 1～200 | 0.5～15 | 100～500 | 200～800 | 200～500 | 200～600 |
| 批内CV（%） | 3～9 | 4～8 | 3～5 | 6 | 3～7 | 1 |
| 批间CV（%） | 5～10 | 8～10 | 3～9 | 10 | 6～7 | 6 |
| 正常值（g/L） | 1.0±0.2 | 1.5±0.2 | 1.2±0.2 | 1.2±0.1 | 1.2±0.2 | 1.7±0.2 |
P:多克隆抗体；M：单克隆抗体；RIA：放射免疫法；ELISA；酶联免疫法；RID：单向免疫扩散法；INA：免疫散射比浊法；ITA：免疫透射比浊法。
（源自：刘秉文，1995.）
表18-2 ApoAⅡ免疫测定法的比较
| | RIA | ELISA | EIA | RID | INA | ITA |
| 抗体 | P | P，M | P | P | P | P |
| 灵敏度（g） | 0.5 | | 20 | 5 | 30 | 20 |
| 测定范围（ng） | 1～20 | 5～50 | 30～60 | 50～400 | 50～900 | 40～150 |
| 批内CV（%） | 7 | 8 | 5 | 5 | 5 | 5 |
| 批间CV（%） | 9 | 7 | 8 | - | 7 | 6 |
| 正常值（g/L） | 0.25±0.4 | 0.35±0.05 | 0.76±0.2 | 0.29±0.02 | 0.37±0.09 | 0.36±0.03 |
（源自：刘秉文，1995.）
表18-3 ApoAⅣ免疫测定法的比较
| | RIA | ELISA | EIA |
| 抗体 | P | P | P |
| 灵敏度（g） | 5 | 0.2 | 20 |
| 测定范围（ng） | 5～50 | 0.5～8 | 50～200 |
| 批内CV（%） | 5 | 3.60 | 5 |
| 批间CV（%） | 7 | 8 | 9 |
| 正常值（g/L） | 0.17±0.03 | 0.14±0.05 | 0.14±0.04 |
（源自：刘秉文，1995.）
表18-4 ApoB[XB]100[/XB]免疫测定法的比较
| | RIA | ELISA | EIA | RID | INA | ITA |
| 抗体 | P，M | P，M | P | P，M | P | P |
| 灵敏度（n） | 5～10 | 2～20 | 50～300 | 300 | 300 | 300 |
| 测定范围（ng） | 0～100 | 2～10 | 20～500 | 50～600 | 300～500 | 100～500 |
| 批内CV（%） | 4～8 | 4～7 | 1～7 | 3～7 | 4～7 | 2 |
| 批间CV（%） | 7～11 | 10 | 3～10 | 6～7 | 7～8 | 2 |
| 正常值（g/L） | 0.9±0.2 | 0.85±0.1 | 0.6±0.3 | 0.8±0.2 | 0.8±0.2 | 0.8±0.3 |
（源自：刘秉文，1995.）
表18-5 ApoCⅠ免疫测定法的比较
| | RIA | ELISA | INA |
| 抗体 | P | P | P |
| 灵敏度（n） | 1 | 5 | 50 |
| 测定范围（ng） | 5～30 | 15～100 | - |
| 批内CV（%） | 7 | 3 | 5 |
| 批间CV（%） | 9 | 5 | 8 |
| 正常值（g/L） | 0.05±0.03 | 0.06±0.002 | 0.06±0.01 |
（源自：刘秉文，1995.）
表18-6 ApoCⅡ免疫测定法的比较
| | RIA | ELISA | EIA | RID | ITA |
| 抗体 | P | P | P | P | P |
| 灵敏度（g） | 10 | 0.3 | 45 | 40 | 10 |
| 测定范围（ng） | 10～80 | 0.5～5 | 70～600 | 40～600 | 12～50 |
| 批内CV（%） | 6 | 3 | 6.5 | 2.1 | 3.3 |
| 批间CV（%） | 10 | 8 | 8.2 | 3.9 | 6.2 |
| 正常值（g/L） | 0.04±0.01 | 0.033±0.008 | 0.04±0.002 | 0.039±0.017 | 0.04±0.01 |
（源自：刘秉文，1995.）
表18-7 ApoCⅢ免疫测定法的比较
| | RIA | ELISA | EIA | RID | INA | ITA |
| 抗体 | P | P | P | P | P | P |
| 灵敏度（g） | 1 | 0.3 | 10 | 76 | 20 | 15 |
| 测定范围（ng） | 2～20 | 1～6 | 20～80 | 76～600 | 50～400 | 30～120 |
| 批内CV（%） | 13 | 4.3 | 8 | 2.5 | 6.3 | 5.2 |
| 批间CV（%） | 13 | 4.3 | 8 | 3.5 | 6.3 | 5.2 |
| 正常值（g/L） | 0.15±0.06 | 0.16±0.03 | 0.12±0.04 | 0.127±0.037 | 0.12±0.03 | 0.11±0.03 |
（源自：刘秉文，1995.）
