二、细胞培养（Bhatl B和McGee JOD,1990）

1．完全培养基 RPMI76.0ml 胎牛血清 20.0ml 植物凝集素2.0ml 抗生素/抗菌素溶液（100×）1.0ml L-谷氨酰胺（100×）　1.0ml [b]2.BudR[/b](5’-Bromo-2-deoxyuridine,5’-溴-2-脱氧尿嘧啶)溶解10mg/ml BudR于dH[XB]2[/XB]O中，0.2μm滤膜过滤除菌，分装后-20℃储存，BudR要在柔光（弱光）下操作。 3．胸腺嘧啶（Thymidine,Thd）按250μg/ml溶解于dH[XB]2[/XB]O中，过滤后分装储存于-20℃。 4．Colcemid(Sigma)5.0μg/ml溶于dH[XB]2[/XB]O中，过滤后分装储存于-20℃。 5．KCl（0.75mol/L）溶解560mg于100ml dH[XB]2[/XB]O中，新鲜配制37℃保存。 6．固定剂甲醇冰醋酸按3：1（V/V）混合即可，现用现配，置冰上待用。 7．缺口平移试剂盒（Amersham和BRL公司） 8．生物素7-dATP(BRL) 9.糖原（BRL） 10．RNA酶A（Sigma） （1）储备液 称取RNA酶A 1g溶于100ml醋酸钠中，置沸水中煮10min，分装后储于-20℃。 （2）工作液 用储备液按1：100稀释。 11．20×SSC NaCl　 175g 柠檬酸三钠 88g dH[XB]2[/XB]O1000ml 固定试剂溶解后，dH[XB]2[/XB]O定容至1000ml，调pH至7.4，高压灭菌。 12．杂交液（高深度，HMmix） 去离子甲酰胺　 6.0ml 100×Denhardt’s液1.0ml 50%硫酸葡聚糖 2.0ml 1%人或鲑精DNA[SB]※[/SB][SB][/SB] 20×SSC ※：临用前加入，终浓度为100～200μg/ml。 该液为高浓度杂交液， 存于4℃。 13．PBT液 BSA　 5% TristonX-100/(PBS) 0.1% 注：BSA液用前应用Whatman 3mm滤纸过滤。 14．兔抗生物素（α-生物素）单克隆抗体 用PBT液1：100稀释。 该单抗现可从英国Dako公司购得。 15．金（10～20nm）标羊抗兔二抗 用PBT液1：50稀释。 16．银溶液（Janesen） 17.Hoedst33258（Sigma） 储备液（100×） Hoedst染料 5mg 甲醇　 10ml 工作液：用2×SSC 1：100稀释储备液。