二、关于探针的标记
[b]（一）cRNA探针的同位素标记[/b]
1．标记液（转录标记）
[img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/shiyongmianyixibaoyuhesuan/shiyongmianyixibaoyuhesuan137.jpg[alt] 标记液（转录标记）[/alt][/img]
2．转录缓冲液
[img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/shiyongmianyixibaoyuhesuan/shiyongmianyixibaoyuhesuan138.jpg[alt]转录缓冲液 [/alt][/img]
※：用地高辛或生物素标记时，用UTP替代。
3．标记终止液
[img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/shiyongmianyixibaoyuhesuan/shiyongmianyixibaoyuhesuan139.jpg[alt]标记终止液[/alt][/img]
4．标记探针水解液
[img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/shiyongmianyixibaoyuhesuan/shiyongmianyixibaoyuhesuan140.jpg[alt]标记探针水解液 [/alt][/img]
先用dH[XB]2[/XB]O悬浮探针，再加入后两种试剂，轻轻振摇混合，于60℃条件下反应。
5．探针水解时间
[img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/shiyongmianyixibaoyuhesuan/shiyongmianyixibaoyuhesuan141.jpg[alt]探针水解时间 [/alt][/img]
注：L[XB]O[/XB]－探针初始长度（kb）
L[XB]f[/XB]－探针的终长度（kb）
K－0.11kb/min
6．探针水解终止液
[img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/shiyongmianyixibaoyuhesuan/shiyongmianyixibaoyuhesuan142.jpg[alt]探针水解终止液 [/alt][/img]
每次加入充分混合，临用前配。
7．探针沉淀液
[img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/shiyongmianyixibaoyuhesuan/shiyongmianyixibaoyuhesuan143.jpg[alt]探针沉淀液 [/alt][/img]
每次加入，充分混合，新鲜配制。
[b]（二）寡聚核苷酸3’端标记（cRNA探针）[/b]
1．标记反应液
[img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/shiyongmianyixibaoyuhesuan/shiyongmianyixibaoyuhesuan144.jpg[alt] 标记反应液[/alt][/img]
2．终止液：0.2mol/L EDTA
3.探针沉淀液
[img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/shiyongmianyixibaoyuhesuan/shiyongmianyixibaoyuhesuan145.jpg[alt]探针沉淀液 [/alt][/img]
（三）cRNA探针非同位素标记（地高辛及生物素）
1．标记液
[img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/shiyongmianyixibaoyuhesuan/shiyongmianyixibaoyuhesuan146.jpg[alt]标记液 [/alt][/img]
△：生物素标记时为10mmol/L的生物素-11-UTP
※：为检测标记率而加。
2．转录标记终止液
（1）0.2mol/L EDTA：用于地高辛标记法
（2）生物素标记终止液：
[img]https://baike.zhuayao.net/Uploads/zyzy/lilunshuji/shiyongmianyixibaoyuhesuan/shiyongmianyixibaoyuhesuan147.jpg[alt]生物素标记终止液： [/alt][/img]
[b]（四）DNA探针标记常用试剂的配制[/b]
（1）10 ×缺口平移缓冲液：200mmol/l Tris-HCl,pH7.4含50mmol/L MgCl[XB]2[/XB];100mmol/Lβ-巯基乙醇、1mg/ml BSA。
（2）缺口平移反应终止液：200mmol/L NaCl;10mmol/l Tris-HCl,pH7.4;11mmol/L EDTA; 0.5% SDS。
（3）DNaseⅠ:干粉状DNaseⅠ(2000～3000u/mg)溶于20mmol/l Tris-HCl, pH7.5中（1mg/ml）,10μl分装，-20℃保存一年。
（4）10×DNA聚合酶Ⅰ（Klenow片段）缓冲液：500mmol/l Tris-HCl,pH6.6;100mmol/L Mg－Cl[XB]2[/XB];10mmol/L DTT;0.5mgBSA。
（5）10×激酶缓冲液：500mmol/L Tris-HCl,pH7.4,50mmol/L MgCl[XB]2[/XB];20mmol/LDTT; 1.0mmol/L亚精胺。
（6）10×随机引物标记缓冲液；500mmol/l Tris-HCl,pH6.6;100mmol/L MgCl[XB]2[/XB];10mmol/Lβ-巯基乙醇；500μg/ml BSA。
（7）1×加尾缓冲液：100mmol/L二甲胂化钾，pH7.0,1mmol/l CoCl[XB]2[/XB]0.2mmol/L DTT。
（8）1mol/L MgCl[XB]2[/XB]:MgCl[XB]2[/XB]47.60g溶于500ml水中，100ml分装，高压灭菌，室温保存。
（9）0.25mol/L EDTA(Ph8.0):EDTA 52.02g溶于400ml水中，调pH至8.0，加水至500ml，100ml分装，高压灭菌，室温保存。
（10）4mol/L醋酸钠：取无水醋酸钠82g溶于200ml水中，用醋酸调pH至6.5，加水至250ml，高压灭菌，或0.45μm膜过滤，室温保存。
（11）10% SDS：10g SDS（十二烷基硫酸钠）溶于50ml水中，加水至100ml，分装后室温保存。
（12）20×SSC：取NaCl 175.3g;柠檬酸钠88.2g;加水至1000ml，用10mol/l NaOH调pH至7.0；高压灭菌，室温保存。
（13）无菌水：100ml去离子水或双蒸水，分装，高压灭菌，室温保存，开瓶后仅限一周使用。
（14）10×激酶缓冲液：500mmol/L Tris-HCl,pH7.4;100mmol/L MgCl[XB]2[/XB];50mmol/lDTT;10mmol/L亚精胺（非必需）。
（15）T[XB]4[/XB]多聚核苷酸激酶：10u/μl，保存在甘油中，-20℃。
（16）TE缓冲液（Tris/EDTA）：Tris,10mmol/l pH7.4(0.5ml 2mol/L贮存液)，1.0mmol/l ED－TA,pH8.0(20μl 0.5mol/L)贮存液，加水至100ml，室温保存。
（17）2mol/L Tris-HCl pH7.4:Tris242.2g溶于850ml，加浓HCl 75ml ,边加边缓慢搅动，至pH7.4,于加水至1000ml。
（18）1mol/L DTT(二硫苏糖醇)：3.0g DTT溶于20ml水中，分装，于-20℃贮存。
（19）0.5mol/L EDTA（乙二胺四乙酸二钠盐）：在烧杯中先加入300ml水，加入93.5g EDTA－Na[XB]2[/XB]·2H[XB]2[/XB]O,充分混匀，加10mol/l NaOH调pH至8.0,加水至500ml。
（20）10mol/L NaOH：200g NaOH溶于450ml水中，混匀，再加水至500ml。
（21）5mol/L NaCl：292.25g NaCl,加水至1000ml。
（22）1mol/L HCl：加86.2ml浓盐酸至913.8ml水中。
（23）1mol/L CaCl[XB]2[/XB]：147g CaCl[XB]2[/XB]：2H[XB]2[/XB]O,溶于1000ml水中,高压灭菌,室温保存。
