六、酶消化液
[b]1.0.1%胰蛋白酶[/b]
试剂:胰蛋白酶 0.1gm
0.1%氯化钙(pH7.8) 100ml
配制方法:先配制0.1%的CaCl2,用0.1mol/L的NaOH将其pH调至7.8,然后加入蛋白酶溶解之。用前将胰蛋白酶消化液在水浴中予热至37℃(载有标本的玻片也在TBS中予热至同样样温度)。该消化液时间约为5~30min。
[b]2.0.4%胃蛋白酶[/b]
试剂:胃蛋白酶 400mg
0.1N HCl 100ml
配制方法:同胰蛋白酶。消化时间在37℃约为30min。
[b]3.0.06% Pronase[/b]
试剂:Pronase 0.06g
0.05mol/L TB(pH7.5) 100ml
配制方法:同前。
在免疫细胞化学染色中,有时经Formalin过度固定的标本,常会产生过量的醛基,遮盖抗原,影响一抗与抗原的结合。用蛋白酶溶液消化,可起到暴露抗原部分的作用。消化时间应根据不同组织而异,总之,在保持组织形态不被破坏的前提下,宜尽量延长消化时间。以上三种酶消化液中,以第一种最为常用。