四、抗组蛋白抗体的检测方法

1．组蛋白的提取方法取大白鼠肝40g加入160ml0.01mol/l Ph7.4 Tris HCl缓冲液，制成匀浆后进行浓度梯度离心（27000rpm×60min），沉淀物中加入蒸馏水90ml，再以超声粉碎仪将细胞打碎，离心（3000rpm×15min）取上清液，再加入一定量的1mol/l 硫酸，使硫酸的最终浓度为0.2mol/L,混匀后，离心（3000rpm×15min），取上清液，加入4～5倍体积的无水乙醇，置于-20[SB]℃[/SB]冰箱3天后，离心（3000rpm×15min）以乙醚洗涤沉淀，真空干燥，储存于-20℃冰箱中备用。 2．酸处理的鼠肾底物　 鼠肾冰冻切片（厚度4μm），以丙酮固定后吹干，密封，在-20[SB]℃[/SB]冰箱中储存备用。用前再于0.1mol/L盐酸中浸泡30min，然后再置于0.01mol/l pH7.4PBS中浸泡2次。 3．组蛋白重建的鼠肾底物在上述酸处理的鼠肾底物上加入30μl乙制备好的组蛋白，稀释浓度为25μl/ml，在室温中湿盒内孵育30min后，以0.01mol/l p7.4PBS浸2次。 4．检测方法用组蛋白重建的鼠肾底物，做间接免疫荧光测定。 5．结果1960年Kunkle首先在SLE中发现抗组蛋白抗体（Antihistone antibody ,AHA），是诊断药物性SLE的一项较好的指标。在活动期SLE中AHA可达90%。