四、抗组蛋白抗体的检测方法

1.组蛋白的提取方法取大白鼠肝40g加入160ml0.01mol/l Ph7.4 Tris HCl缓冲液,制成匀浆后进行浓度梯度离心(27000rpm×60min),沉淀物中加入蒸馏水90ml,再以超声粉碎仪将细胞打碎,离心(3000rpm×15min)取上清液,再加入一定量的1mol/l 硫酸,使硫酸的最终浓度为0.2mol/L,混匀后,离心(3000rpm×15min),取上清液,加入4~5倍体积的无水乙醇,置于-20[SB]℃[/SB]冰箱3天后,离心(3000rpm×15min)以乙醚洗涤沉淀,真空干燥,储存于-20℃冰箱中备用。 2.酸处理的鼠肾底物  鼠肾冰冻切片(厚度4μm),以丙酮固定后吹干,密封,在-20[SB]℃[/SB]冰箱中储存备用。用前再于0.1mol/L盐酸中浸泡30min,然后再置于0.01mol/l pH7.4PBS中浸泡2次。 3.组蛋白重建的鼠肾底物在上述酸处理的鼠肾底物上加入30μl乙制备好的组蛋白,稀释浓度为25μl/ml,在室温中湿盒内孵育30min后,以0.01mol/l p7.4PBS浸2次。 4.检测方法用组蛋白重建的鼠肾底物,做间接免疫荧光测定。 5.结果1960年Kunkle首先在SLE中发现抗组蛋白抗体(Antihistone antibody ,AHA),是诊断药物性SLE的一项较好的指标。在活动期SLE中AHA可达90%。