二、双链DNA抗体（Double strand DNA antibody, dsDNA）的检测方法和应用

目前的研究指出，用免疫细胞化学检查病人血清中的dsDNA抗体为作为系统性红斑狼疮的诊断依据之一。佐佐木毅等和徐世玉等发现一些临床症状和血清学检查不典型的红斑狼疮病人，在发病早期就出现抗dsDNA抗体，认为这可能有助于早期诊断。 [b]1．用马疫锥虫抗原检测抗dsDNA抗体方法[/b] （1）底物制备：用马疫锥虫感染小鼠2～4天后，取小鼠的外周血，按血液细胞计数法作马疫锥虫计数，达到4.3×10[SB]6[/SB]～5.6×10[SB]6[/SB]时即采尾血涂片，空气干燥后直接使用或4℃保存备用。 （2）方法和结果：血涂片加入少量水溶去红细胞，待干。加入一滴被检血清于其上，移湿盒中，在室温中30～40min，用0.01mol/lpH7.4PBS洗5～10min，取出吸干，加兔抗人IgG荧光抗体，在湿盒中染色30～45min，再按上法洗片，待干，荧光显微镜检查。阳性者可见锥虫的核及动基体发出明亮绿色荧光。 [b]2．用短膜虫抗原检测抗dsDNA抗体方法[/b] （1）底物制备：用北京生物制品研究所制备的短膜虫涂片标本作抗原。 （2）方法和结果：用上述马疫锥虫抗原的间接免疫荧光染色法。短膜虫是一种血鞭毛虫，动基体中含纯净的dsDNA可作为抗原，阳性结果可见虫体近尾或中部有一致密荧光亮点，为动基体，近头部有一淡绿色亮点，为细胞核。阴性结果动基体上无荧光。阳性血清自1：5稀释，测定效价。 [b]3．用酸洗脱鼠肝细胞抗原检测抗dsDNA抗体方法（参考Ta的方法）[/b] （1）底物准备：将6个月小白鼠剪断上腔静脉，立即用0.01mol/l pH7.4 的PBS从门静脉灌洗至鼠肝发白，取出肝组织剪成接触面为0.15cm×0.5cm的小块，印片，空气中干燥后用丙酮固定10min，再空气干燥。浸入0.1mol/l HCl中洗脱30min，并轻轻的摇动，随后，再用0.15mol/l PBS pH7.4洗2次，每次10min，再用0.01mol/l pH7.6的PBS洗5min，空气干燥。即可用或在4[SB]℃[/SB]中贮存。 （2）方法和结果：用间接免疫荧光法检测，阳性结果可见细胞核呈黄绿色荧光。用酸洗脱鼠肝细胞标本作抗原与马疫锥虫、短膜虫法比较结果，和马疫锥虫法符合率达93%，其中马疫锥虫法4例阳性，为系统性硬皮病，而此法为阴性，说明此法较马疫锥虫法更特异。此法与短膜虫法比较，符合率为95%，P>0.05，说明二法无显著差别。其中此法阳性而短膜虫法阴性的3例，均符合系统性红斑狼疮诊断，并均有肾损害。短膜虫法阳性而此法阴性的6例均为待查病例，不能证实为系统红斑狼疮诊断，说明此法在特异性方面更佳。