二、肝硬变免疫细胞化学

肝硬变或称肝硬化（liver cirrhosis）是多种原因引起的慢性肝脏疾病，其中原因之一是和HBV慢性感染有关，特别在中国HBV可能是引起肝硬变的主要原因。HBV感染引起乙型肝炎，部分病例变成慢性活动性肝炎，进而转变成肝硬变。其中大部分为门脉性肝硬变（小结节　型肝硬变），小部分为坏死后性肝硬变（大结节　型肝硬变）。近年来在我国通过临床、病理及免疫病理的研究证明，HBV感染与肝硬变的发生有十分密切关系，在肝硬变内HBsAg检出率为70%～90%。世界其它一些国家和地区，如日本、印度、非州、香港等也有类似的报道。肝硬变的发生可能是由于机体免疫机能不足，不能将HBV完全杀灭和排除。在机体内HBV不断复制繁殖，并通过免疫机制使肝细胞反复遭受破坏，以及肝细胞结节　状再生，纤维组织不断增生，形成纤维隔，致使正常的肝小叶结构破坏，最后形成肝硬变。下面用免疫细胞化学（PAP），亲合免疫细胞化学（ABC）等方法对HBV抗原、纤维结合蛋白（FN）、III型胶原和细胞角蛋白在肝硬变组织内定位及分布进行描述。 [b]（一）肝硬变组织内HBV抗原的定位及分布[/b] 用免疫细胞化学（PAP）及免疫亲合素（ABC）方法在肝硬变组织内对HBV抗原（HBsAg ,pre –S[XB]1[/XB],pre-S[XB]2[/XB],HBcAgHBxAg）进行了检测，观察了它们在肝细胞，kupffer 细胞内等定位和其分布状态。 1．HBsAg 、pre –S[XB]1[/XB]和pre-S[XB]2[/XB]在肝细胞内分布HBsAg在肝硬变组织中检测率为70%～80%，其中86%伴有肝细胞不典型增生；pre –S[XB]1[/XB]和pre-S[XB]2[/XB]的检出率为60%～70%，其中84%伴有肝细胞不典型增生。HBsAg 、pre –S[XB]1[/XB]和pre-S[XB]2[/XB]抗原经常出现于肝硬变组织的同一部位，甚至同一细胞内。少数情况下，HBsAg阳性,而pre –S[XB]1[/XB]或pre-S[XB]2[/XB]阴性，反之，HBsAg 阴性,而pre –S[XB]1[/XB]或pre-S[XB]2[/XB]阳性。HBsAg 、pre –S[XB]1[/XB]和pre-S[XB]2[/XB]抗原主要位于肝细胞浆内，部分位于膜上，少数位于核内。在部分肝硬变病例中，HBsAg 、pre –S[XB]1[/XB]和pre-S[XB]2[/XB]在也见于kupffer细胞内及肝内胆管上皮细胞内。 2．HBcAg 在肝细胞内的分布HBcAg 在肝硬变组织内的检出率为20%左右，其中82%伴有肝细胞不典型增生。HBcAg 阳性检出率明显低于HBsAg 、pre –S[XB]1[/XB]和pre-S[XB]2[/XB]，这可能是由于HBcAg 和抗-HBc在核内形成免疫复合物，以至HBcAg 被封闭之故。HBcAg 主要位于肝细胞核内的形态表现为分布与肝炎的相似。在少数病例HBcAg 阳性物质也见于汇管区的纤维组织内及肝窦壁上。 3．HBxAg 在肝细胞内的分布HBxAg在硬变组织的检出率为80%左右，其中85%伴有肝细胞不典型增生。HBxAg的检出率和HBsAg相似。HBxAg阳性物质呈细颗粒状。主要位于肝细胞浆内，少数位于胞核内及胞膜上。HBxAg在肝细胞内的形态表现及阳性细胞的分布状态与HBsAg相似。有部分病例HBxAg沿着肝硬变的纤维隔分布。HBxAg阳性物质也见于肝内胆管上皮细胞及kupper细胞内。 4．IgG(抗—HBc )在肝细胞内的分布在肝硬变组织内可观察到抗-HBc的存在，其阳性率与HBcAg相似。该抗体经常和HBcAg以复合物的形式存在于肝细胞核内，少数也见于胞浆内及膜上。抗-HBc阳性物质在肝硬变细胞内的存在和阳性细胞的分布状态与HBcAg相同。 [b]（二）肝硬变组织内纤维结合蛋白（FN）的定位及分布[/b] 纤维结合蛋白（fibronectin, FN）是一个非胶原性的大分子糖蛋白。近年来研究发现它与损伤修复及器官硬化有密切关系。在肝硬变及慢活肝的组织内FN沉积增加，可能与肝硬变时纤维组织隔形成有关系。在肝硬变组织内，FN阳性物质位于肝细胞内及kupffer细胞内，其阳率分别为59%、65%。FN阳性物质弥漫分布于胞浆内，阳性细胞多呈三五成群地分布于假小叶边缘、中央静脉旁及肝实质内灶（片）状杯死区域的附近。汇管区及纤维隔内可见数量不等的FN阳性的组织细胞和纤维母细胞。此外。有的病例肝窦壁、血管内皮及小胆管基底膜也呈阳性反应。FN阳性检出率和HBsAg阳性呈正相关，在FN阳性病例中有80%HBsAg阳性。而活动性肝硬变FN阳性明显高于非活动性肝硬变（P<0.01）。上述结果表明，在由HBV感染引起的肝硬变过程中，FN参与了肝硬变的形成。 [b]（三）肝硬变组织内III型胶原的定位及分布[/b] 在肝硬变时，I、III型胶原增加，这与肝纤维化有密切关系。实验结果证明，在惭性迁延性肝炎→慢性活动性肝炎→肝硬变之间，Ⅰ、Ⅲ型胶原的分布呈逐渐增加的趋势。除汇管区Ⅰ、Ⅲ型胶原增多外，中央静脉周围及小叶内坏死区、炎症区也增多，形成小叶内纤维化与从汇管伸向小叶内纤维组织相连形成纤维隔。在部分肝硬变病例，肝细胞内有Ⅲ型胶原阳性反应。在纤维隔及假小叶的窦壁上Ⅲ型胶原阳性率为100%，在肝细胞内为34%。Ⅲ型胶原在宽大纤维隔内呈弥漫密集分布，在窦壁上为连续线状分布，在肝细胞浆内呈弥漫分布。阳性肝细胞主要位于小叶边缘或近纤维隔处。动物实验证明Ⅰ、Ⅲ胶原是由肝细胞合成产生的，并参与肝硬变的形成。 [b]（四）肝硬变组织内角蛋白定位及分布[/b] 在正常肝脏中肝细胞和胆管上皮细胞各有其特征性的细胞角蛋白（CK）组型，它们是各自形态发生的过程中建立的。研究结果表明在肝硬变组织中有81%呈角蛋白阳性反应，但阳性反应程度各病例是不相同的。CK阳性的肝细胞主要位于汇管区周围。尤其是碎屑状肝细胞坏死附近，并常伴有肝细胞小管状化生、弧立肝细胞团块形成及胆管或胆小管增生，它们之间在细胞形态和阳性强度上有移行关系，有的病例整个假小叶CK阳性。部分肝小多角型细胞也呈阳性反应。在肝硬变组织内CK阳性反应与HBsAg阳性呈正相关。CK阳性的肝硬变中绝大多数HBsAg也阳性，这一结果HBV感染所致的慢性肝脏病变可引起CK的异常表达。