四、结果的可比性

1．如研究胃粘膜中抗体产生细胞应当掌握在HE染色时的车轮状核位于胞浆一侧，胞浆特别丰富，染色时仅胞浆着色而核不着色等特点。同时应了解所研究的抗原在组织中的大致定位及分布规律。如分泌5-羟色胺的内分泌细胞多位于固有层间质内，VIP和SP分布在固有层神经末梢及粘膜下层的神经元，胃泌素细胞分布胃肠腺体细胞之间。CEA多分布在腺癌细胞，如果在固有层内出现阳性细胞，要谨慎对待，必须排除污染、内源酶或自发荧光，同时与连续切片的HE染色切片对比观察才能作出判断。 2．阳性结果的定量分析免疫细胞化学和免疫组织化学染色受到的影响因素较多，最好在相同组织加工方面、统一批号抗血清和标记抗体、统一染色技术和结果判定方法，同时对病态和正常组织进行对照观察才能增加可比性。用免疫组织化学进行抗原定量分析时，可根据着色程度，选用某一基点为标准进行半定量计数，但容易受主观因素的影响。近年来，数字减影技术的应用，大大提高了定量研究的准确性。对阳性细胞的计数，多采取以下几种方法： （1）直接计数法：以10～20个随意选择的高倍视野直接进行阳性细胞计数，或计算100～200个总细胞中阳性细胞的数量。由于阳性细胞分布的不均匀性，可能存在一定误差。 （2）体积计数法：测定单位面积内的细胞数，再算出每立方毫米体积内阳性细胞总数。一般组织切片只有5～7μm厚，与1mm厚度组织切片的细胞密度不可能完全一致。 （3）细胞密度计数法：即计算单位粘膜面积的阳性细胞数。有人提出以0.5mm宽，粘膜切面会层（约0.6mm）作为一个单位。因内窥镜取材时，组织块不规则，显微镜下要具体选择有一定困难，。我们用改良的Dellesses公式进行计算比较方便。原公式NV=N（P∑r[SB]2[/SB]）×10[SB]9[/SB]，NV代表每立方毫米体积细胞数；N代表细胞总数，r为测微器小方格边长（μm）；∑为切片厚度（μm）；P为小方格数。我们只计算每平方毫米面积细胞数，即D=N/（P∑r[SB]2[/SB]）（r单位为mm）。方和边长为0.5mm的测微器放在目镜下，物镜放大4倍，即用测微器去量放大4倍的物体，测出的边长必须缩小4倍才是物体的真正面积，已知r为0.5mm，将上述数据代入公式，得D=N（r/4）[SB]2[/SB]=16N/(Pr[SB]2[/SB])=16N/(P(0.5)[SB]2[/SB])=64N/P。只要计算整个组织切片的细胞数和所占小方格数，即可得出阳性细胞密度（细胞数/mm[SB]2[/SB]）。组织分离细胞可通过流式细胞仪进行计数。