三、彩色免疫金银法（CIGSS）

彩色免疫金银法（coloured IGSS简称CIGSS）是在IGSS基础上发展起来的一种新方法。其基本原理与彩色显影相似。IGSS方法染色在抗原位点处生成银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的作用即被氧化成溴化银，后者与彩色显影剂相接触立即被还原成金属银，而彩色显影剂本身则被氧化，其氧化产物使彩色成色剂由无色变成有色的染料并沉积在银颗粒的部位，金属银变成了银离子。由于染料只能通过彩色显影剂沉积在有银的部位，所以不与组织发生非特异性吸附。 以彩色显影人肝组织内HBsAg的操作过程为例： （1）脱蜡至水。 （2）0.1%胰蛋白酶37[SB]℃[/SB]10min。 （3）Lugol＇s,碘液5min。 （4）5%硫代硫酸钠1min。 （5）用0.05mol/l pH7.4 TBS振洗5min，两次。 （6）1%卵白蛋白封闭10min。 （7）马抗HBsAg抗体1：1000稀释，37[SB]℃[/SB]1～2h 或4[SB]℃[/SB]过夜。 （8）0.05mol/l pH7.4 TBS振洗5min，两次。 （9）1%卵白蛋白封闭10min。 （10）PAg 1：40，37[SB]℃[/SB]45min。 （11）0.05mol/l pH7.4 TBS振洗5min，两次。 （12）双蒸水洗5min，两次。 （13）物理显影（见P116页物理显影配方）。 （14）自来水冲洗。 （15）双蒸水洗5min，两次。 （16）2%铁氰化钾和1%溴化钾，1min。 （17）双蒸水冲洗。 （18）彩色显影（α-萘酚或菲尼酮）2min。 （19）双蒸水冲洗。 （20）2%铁氰化钾和1%溴化钾，1min。 （21）2%铁硫代酸钠和1%亚硫酸钠，5min。 （22）流水冲洗。 （23）如需要可用苏木素或核红复染。 （24）缓冲甘油封固，观察。 结果：CIGSS的优点：①阳性结果比黑色更鲜明;②可以使弱信号得到放大;③消除IGSS背景染色;④信号/背景比值高;⑤是开展免疫金银双标技术的新途径.光镜下见HBsAg阳性物质呈鲜艳的蓝色(α-萘酚为成色剂)或呈绿色(菲尼酮为成色剂)。背景干净，阳性结果清楚。