（一）免疫金法（IGS）

1987年，Geoghegan等首次应用免疫金探针检测B淋巴细胞表面抗原，建立了用于光镜水平的免疫金法（Immunogold staining, IGS）。IGS的特点是染色程序简便，不要显色，就能检测细胞表面的抗原，又能检测细胞内抗原。染色时免疫金法一般要求金颗粒的直径大于20nm，并且用的浓度较高。用IGS定位细胞抗原时一般都采用间接法，下面以人肝组织HBsAg的定位为例说明IGS的步骤： （1）石蜡切片→脱蜡至水。 （2）0.1%胰蛋白酶消化10min或3mon/L尿素消化30min。 （3）用双蒸水振洗5＇×2。 （4）用0.02mol/l TBS pH8.2振洗10＇×2。 （5）1%卵蛋白（EA）封闭10min。 （6）稀释鼠抗HBsAg单克隆抗体（用0.02mol/l TBS pH8.2 作1：100稀释），4[SB]℃[/SB]过夜。 （7）0.02mol/l TBS pH8.2振洗10＇×2。 （8）1%EA封闭10min。 （9）0.02mol/l TBS pH8.2 稀释兔抗鼠金标抗体（1：8）37℃45min。 （10）0.02mol/l TBS pH8.2振洗10＇×2。 （11）双蒸水振洗5＇×2。 （12）1%戊二醛，10min。 （13）双蒸水5min 。 （14）用苏木素衬染核1min，甘油封片。 结果：在光镜下可见部分肝细胞浆内有金颗粒聚集呈红色，沿细胞膜分布，表明有HBsAg定位在细胞浆内。