（四）鞣酸—柠檬酸三钠还原法（Slot与Gueeze1985年）

该法是以1982年Muhlpfordt法为基础，1985年Slot与Geuze对该法进行了改良，特点是通过改变鞣酸的用量制备出多种颗粒直径的胶体金，而且颗粒的直径均匀一致，很适合于双标及多标研究。制备3nm、5nm、10nm、15nm的胶体金颗粒见表5-3。 表5-3 鞣酸—柠檬酸三钠还原法

A 液					B 液
直径（nm）	1%柠檬酸钠（ml）	0.1mol/L K[XB]2[/XB]CO[XB]3[/XB]ml	1%鞣酸（ml）	H[XB]2[/XB]O（ml）	1%HAuCl[XB]4[/XB]（ml）	H[XB]2[/XB]O（ml）
3.3	4	0.2	4	11.8	1	79
5	4	0.2	0.7	15.1	1	79
10	4	0.025	0.1	15.875	1	79
15	4	0.0025	0.01	15.987	1	79

操作步骤： （1）根据所需要的胶体金颗粒分别配制A液和B液。 （2）将配制好的A、B两液在水浴内加热到60℃，并通过控温装置使温度保持稳定。 （3）在电磁搅拌器上搅拌A液迅速加入B液，继续加热直至胶体金变成葡萄酒色，时间大约7～10min。在A、B两液混合后可见溶液立即变成蓝色，大约1～3min就变成红色。 用鞣酸—柠檬酸三钠还原法，柠檬酸三钠主要为还原剂，而鞣酸则有双重作用，一是还原作用，二是保护作用，控制“晶核”的形成过程，也就是说鞣酸的用量多少决定胶体金颗粒的大小形成，因此改变鞣酸的用量就可以改变胶体金的颗粒大小，达到制备不同直径颗粒的胶体金之目的。