(一)切片

1.连续切片(Serial sectioning technique) 连续切片是两种物质共存研究中应用最早的方法之一,是用相邻切片分别孵育两种不同特异性抗体进行ICC染色,主要适用于观察同一细胞内不同抗原的分布。该方法要求切片足够薄,保证每个细胞能同时出现在3~4张相邻切片上,第1和3张切片用相同抗体染色均阳性时,作为阳性结果,可信度较高,可避免结果判断困难。所以,常采用石蜡切片,厚约2μm左右,若用树脂包埋的半薄切片(0.5~1μm),比较容易识别同一细胞内两种抗原的共存。 2.镜影切片法(Mirror sectioning technique) 所谓镜影切片,简单地讲就是两张相邻的石蜡切片(厚2μm)或冰冻切片(厚3~4μm),第二张反转之,贴于载玻片上,同一细胞在两张相邻的切片上呈镜与影的关系(相当于冰冻蚀刻电镜的P面和E面)。分别孵育两种不同抗体,ICC染色,观察其在同一细胞内的分布。