胃粘膜幽门螺杆菌感染检测方法对比研究

自1983年澳大利亚学者Warren和Marshall报告在人胃粘膜活检组织中分离出幽门螺杆菌（Helicobacter pylori·Hp）以来，国内外学者对Hp和上消化道，尤其是胃和十二指肠疾病的关系，有关Hp感染的检测方法等问题进行了大量研究和报道，并取得了一定成果；目前多数学者公认Hp感染与慢性胃炎、消化性溃疡的发生、治疗及预后有着重要关系，因此研究Hp感染的检测方法；如何提高Hp感染检出率，是当前学者研究的热点，并提出了快速尿素酶药盒检测法、活检胃粘膜印片法及病理切片各种染色光镜检查法、血液Hp培养法、抗Hp抗体检测法，尿素酶呼吸试验法、聚合酶链反应（PCR）扩增尿素酶A或B基因检测法等；但上述方法中，有些价格昂贵、操作复杂，有些费时费事，故很难在广大基层医院推广。本研究的目的在于对一般基层医院能开展的快速尿素酶法、胃粘膜印片法、病理切片染色检查法进行对比研究，试图寻找出能提高Hp感染阳性检出纱的互补方法，并对大津科锐公司生产的快速尿素酶试剂盒进行评价，从而有利于使更多医院能对Hp与上消化道疾病的关系进行临床研究。 [b]1　对象和方法[/b] 1.1　对象 本研究组为1995—04～1996—02—01，因具有各种上消化道症状到本院消化内科门诊就诊及在消化内科信婃的病人共100例，其中男73例、女27例，年龄在18岁～80岁，平均年龄44.7岁。经纤维内镜直观及活组织病理检查证实：慢性萎缩性胃炎43例、十二指肠球部溃疡27例、胃溃疡3例、病程在0.5a～30a；所有病人均在多所医院治疗并均正在服用质子泵抑制剂、H[XB]2[/XB]受体阻滞剂，各种铋剂、中药，少数病人曾服用过羟氨苄青霉素，痢特灵、庆大霉素等药物；对上述病人不加选择全部进入本研究组。 1.2　方　法 首先于胃镜检查时均于距幽门口3cm～5cm处取活组织1～2块，同时用尿素快速检测法、印片法、病理切片染色法检查胃粘膜Hp感染情况；其次于病变明显处取活组织2～4块做病理组织学检查，以协助胃镜直观所见做出正确临床诊断；Hp检测的三种具体方法是：快速尿素酶法——将两滴试剂滴入反应板孔中，再将所取的胃粘膜块放入其中，观察5min，如变为红色者为阳性，不变色者为阴性（本研究试剂盒由天津科锐公司提供）；粘膜印片法——将所取之粘膜用钳子钳好，以其粘膜面对准清洁玻片反复印片，待玻片印片处干燥后用1％中性红染液1～2滴滴于该处，染色5min后蒸馏水缓缓将染液冲去，自然干燥，加盖玻片封存，在光镜下可见呈弯曲状或S状、红色幽门螺杆菌（此法先于快速尿素酶法，将印片后的组织再做快速尿素酶检测用）；病理切片染色法——对所取之粘膜先用10％福尔马林固定、切片、美蓝染色、透明中性表封固在光镜下可见直径为0.3μm～0.5μm1，长1.0μm～1.5μm，弧形或S形的幽门螺杆菌。 [b]2　结果[/b] 本组100例病人快速尿素酶法Hp阳性者31例、粘膜印片法阳性者47例、病理切片美蓝染色法阳性者44例，阳性检出率分别为31％，47％及44％，天津科锐公司提供的快速尿素酶试剂盒检测Hp结果的病理切片（“金标准”）对比，快速尿素酶法假阴性13例、假阳性2例，印片法＋病理检查法阳性者共50例、阳性检出率可达50％；详情见表1。天津科锐公司提供的试剂盒做快速尿素酶试验在同样病人检出Hp感染的阳性率低于印片法及病理检查法。和后两种方法比较有一定差异（P＜0.05，表1）。 表1　三种方法检测100例病人胃粘膜Hp感染结果　（n：100）

方　　法	阳性例数	阳性率
快速尿素酶法	31	31％
粘膜印片法	47	47％
病理切片染色法	44	44％

三种方法对受检之100例病人中共5种疾病，其结果不尽相同，但均以十二指肠球部溃疡Hp感染检出阳性率最高，快速尿素酶法为40.7％、印片法为63.0％、病理染色为55.6％，平均为53.1％（表2）。 表2　三种方法与五种疾病胃粘膜Hp感染检出情况

疾病种类	n	快速尿素酶法		印片法		病理美蓝染色法
		阳性数	阳性率(％)	阳性数	阳性率(％)	阳性数	阳性率(％)
浅表性胃炎	24	4	16.60	8	33.33	7	29.16
萎缩性胃炎	43	14	32.58	20	46.51	20	46.51
十二指肠溃疡	27	11	40.74	17	62.60	15	55.55
胃溃疡	3	1	33.33	1	33.33	1	33.33
胃癌	3	1	33.33	1	33.33		33.33

[b]3　讨论[/b] 为进一步研究Hp感染与上消化道一些疾病的关系，提高诊断治疗效果，近十多年以来，国内学者在Hp的研究中，对Hp检测方法的研究十分重视；大量国内外文献一致认为：快速尿素酶试验法、血液Hp培养法、活检胃粘膜切片各种染色光镜检查法、抗Hp抗体检测法、尿素酶呼吸试验法、聚合酶链反应扩增尿素酶基因检测法，其特异性强、敏感度高可做为检测Hp感染的“金标准”（Gold Standard）近些年提出的“活检胃粘膜印片法”，其特异性、敏感性、阳性检出率也较高，可在临床推广应用；方法虽多，但仍以聚合酶链反应扩增尿素酶基因检测法之特异性、敏感度最高，分别为100％及96％～98％，且可用於唾液、胃液、粪便中Hp检测。遗憾的是这些方法，价格昂贵、操作持技术复杂、费事费时，难於在基层医院广泛开展。其它方法由於特异性差或敏感性低，故其阳性检出率低，甚致出现假阴性或假阳性。张家滨等在1603例快速尿素酶检测中慢性胃炎阳性率为55％和贾博琦报告的54.7％近似（其中慢性浅表性胃炎的阳性率为49.7％），十二指肠溃疡的阳性率为79.1％，胃溃疡的检出率为77.8％，胃癌的阳性检出率为51.9％（14/27）；高国藩等对1800例病人中用活检胃粘膜印片法检测中慢性浅表性胃炎阳检出率为23.0％，萎缩性胃炎为51.5％，十二指肠溃疡为69.0％、胃溃疡为59.7％；徐朝斌等在对386例胃粘膜病理切片用银染色法检测其Hp，总检出率为70.5％，其中慢性活动性胃炎为97.6％，非活动性胃炎为56.71％。上述国内文献报告的这三种方法，尤其是快速尿素酶检测法，其特异性、敏感性及阳性检出率均不够理想。本文对这三种方法对比研究结果显示其阳性检出率更低，快速尿素酶法仅为31％，胃粘膜印片法为47％，病理切片法（美蓝染色）为44％；分析其原因主要有三；一是本组100例病人均是在服用质子泵抑制剂、H[XB]2[/XB]受体阻滞剂、各种铋剂、痢特灵、庆大霉素及中药的同时进行的检查，而不是在停药1个月后再做检查、更不是初诊从未接受过治疗的人，众所周知上述药物均有不同程度的抗Hp作用，而检查时病人正处于胃粘膜Hp感染被清除的阶段，故阳性检出率低（国内上述文献报道对此问题均未做交待）；二是Hp在胃窦分布多呈灶性分布，每次取材不一定能准确的把隐藏Hp的粘膜都取出，也会影响Hp检出率；三是本组中十二指肠溃疡Hp检出率是最高的，这也会影响本组阳性检出率，但从三种方法检查结果来看其阳性率和国内外文献报道也有相同之处，即尿素酶检测法阳性率低于胃粘膜印片检检查法和胃粘膜印片检查法的阳性率；本文病理切片检查法和胃粘膜印处近似，并不高于胃粘膜印片法是与病理切片染色方法有关，即本文病理切片不是银染色、而是美蓝染色。另外从本组100例检查结果来看三种方法均呈现十二指肠溃疡者Hp检出率最高，依次为慢性胃炎、胃溃疡及胃炎，这些结果和国内外报道也一致。综合上述我们认为：一、天津科锐公司生产的快速素酶试验剂盒是可以推广应用的，二、为在基层小医院能更好的开展Hp感染与上消化道疾病关系的研究，还应推出一种能提高Hp阳性检出率、且能在小医院开展的互补检测法。 Hp感染与上消化道疾病关系的研究将是二十一世纪研究的热点，但使用特异性、敏感性、阳性率高的一此复杂昂贵的技术，仅能在少数较大医院及研究机构开展是远远不够的；只有在众多的基层小医院开展并有更多的消化科医师参加，才能加快研究速度、更早的高搞清Hp感染和上消化道疾病的关系。为此我们提出如下设想，供同行考虑；一是对每例病人最好都做二种或三种本文提出的方法，如同时采用快速尿素酶检测法及胃粘膜印片法，争取病理切片银染法以进行互补检查，把二种或三种检查所检出的Hp真阳性率相加去提高检出率——即互补检查法。二是鉴于胃粘膜中Hp感染的灶分布特点，建议在做快速尿素酶法检查时每例病人在胃窦不同部位最少取两块活组织，可能有望提高其阳性检出率，三是请生产快速尿素酶检查试剂盒的厂家进一步在如何提高药盒的敏感染度上下功夫进行改进，也有可能提高Hp感染阳性检出率，如能在消除假阳性上做一改进则更好；以上是通过本组研究后的想法，是否恰当，需进一步研究。