幽门螺杆菌的检测现状

自1983年国外学者发现幽门螺杆菌（Hp）以来，有关该菌的研究及其与上消化道疾病的关系研究取得了长足进展，尤其是有关Hp检测方面的研究，已经逐步深入和普及，并取得委很多可喜的成果。 一般根据检测同时是否需做胃镜检查分为：①侵入性诊断方法，必须在胃镜下取材。包括：尿素酶试验、细菌培养、活检标本切片染片和直接涂染色等。②非侵入性诊断方法，不需胃镜。包括：[SB]13[/SB]C，[SB]14[/SB]C呼吸试验、血清免疫学检测，[SB]15[/SB]N尿素排泄试验等。 [b]1　尿素酶试验[/b] 该试验是所有检测手段中最为简便迅速的一种方法，在胃镜检查同时进行，敏感性和特异性分别达91％和100％，数分钟即可做出诊断。检查结果与直接涂片法、分离培养法、组织病理结果一致或近似。活检标本的尿素酶活性主要与感染的数量多少有关，量少时可能造成假阴性反应，而其它产生尿素酶的细菌也可能造成假阳性。但仍不失为一种最初检测Hp感染的有效手段。 [b]2　细菌学检测[/b] 2.1　细菌培养 胃粘膜组织的细菌培养是诊断Hp感染的最可靠方法，往往做为验证其他检测手段的“金标准”。但不少因素可能会影响Hp的培养而致假阴性。如：胃粘膜组织中的Hp数量过少，细菌繁殖能力差等。 2.2　活检标本切片染色 将胃粘膜组织标本用100％福尔马林固定，常规石蜡包埋、切片染色、染色的方法有很多种，主要有Warthin－Starry（WS）染色，改良Gitmsa染色，Gresyfast染色，阿的平染色，HE和荧光染色，其中WS染色效果最好，特异性和敏感性几乎均达100％。但该法繁琐费时，且需一定技术，HE染色细菌清晰易辨，既可供组织学诊断用，又可检查Hp。吖啶橙荧光染色，Hp易辨认，且方法简单、快速，尤其在Hp量少时优于WS和Giemsa染色，不易漏诊。 2.3　直接涂片染色 Pinlard用相差微镜直接检查涂于玻璃片上的胃粘膜Hp，敏感性达100％。有人用吖啶橙进行染色，然后用荧光量微镜观察，诊断快速有效。还有人用单克隆抗体进行免疫荧光染色，可提高特异性，特别是对形态不典型的Hp。 [b]3[SB]13[/SB]C、[SB]14[/SB]C呼吸试验[/b] 呼吸试验的原理是基于Hp在体内产生大量的尿素酶，困此若给感染Hp的患者口服同位素标记的碳的尿素溶液，则尿素被分解后产生的同位素标记二氧化碳从肺呼出。可收集呼气样本，用液体闪烁计数器或用气体同位素质谱议检测同位素标记CO[XB]2[/XB]的量，检测Hp的敏感性和特异性分别达100％和88％，Hp清除后则呼出减少或消失。根据标记物的不同，分为[SB]13[/SB]C和[SB]14[/SB]C呼吸试验。呼吸试验具有快速、可靠、安全、无痛苦的优点。国外已将其作为追踪观察治疗效果的最好办法，且适合于大规模流调，它优于血清学的一个明显特征是表明目前是否有Hp感染，而是是曾否感染过。 [b]4　血清免疫学方法[/b] 4.1　ELISA法 通过测定血清中的Hp抗体来检测Hp感染，其方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）、补体结合法、免疫印迹法（immunoblotting）和血凝试验，其中以ELISA法最为常用。但在进行ELSIA试验时，最重要的是抗原选择，较早期的一些抗原是应用全菌或全菌超声粉碎物作抗原，这种抗原制备含有多种菌体及鞭毛蛋白。其中有些物质或不具备抗原性功者为其它菌种的共有结果是试验的敏感性虽高，但缺乏特异性，从而影响试验结果的判断。要提高ELISA方法的敏感性和特异性，则需要对抗原进一步纯化。用Hp多种抗原制品的混合物纯化尿素酶组分，抗原则可获较高的特异性与敏感性。陈晶晶等采用ELISA法对676份人血清进行了抗HpU抗体的检测，以特异性抗HpU抗体的含量为66μg/l标准阳性血清做为判断标准，其敏感性及特异性各为98％和96％，用纯化尿素酶做为抗原应用于ELISA试验属于第二代血清学诊断抗原，适用于血清流行病学调查，还可用于药物治疗效果的观察和筛选消化不良患者。 为提高血清学方法诊断Hp感染的敏感性和特异性，潘志军等用免印迹法检测血中抗HpIgG，结果敏感性为100％，特异性为90％，阳性预测值阴性预测值分别为97.2％和100％。与空肠弯曲菌和结肠弯曲菌无明显交叉反应。因此，目前一般认为，免疫印迹法比ELISA方法具有更高的敏感性和特异性，可用来确诊其他血清试验结果，尤其是对处于界值附近的患者血清。 4.2　聚合酶链反应（PCR） 该技术的敏感性比寡核甙酸探针增加了100倍，可以检出至少100个Hp。目前Hp的尿素酶基因和16SrRNA基因的部分序列已经测出，为PCR特异性引特的选择提供了依据。胡伏莲等用PCR检测了96例因上消化道症状而行胃镜检查的患者，结表明PCR检查的Hp阳性率高于常规检查法的Hp阳性率。另外还对17例经不同方案治疗后用常规方法检查而被认为Hp被根除的病人，用PCR检查发现4例Hp阳性。以往对一些用常规方示未能检了实际上还存在Hp的病人，误认为Hp被根除而放弃不彻底，而不是新菌株再感染。所以采用PCR技术能准确评估治疗后的Hp是否被真正根除，这对于指导Hp感染的治有十分重要的临床意义。PCR的另一优点是可以成功地检出人胃粘膜以外的用常规方法不能检出Hp，包括胃液、唾液、牙菌斑及粪便中的Hp。 4.3　PCR单链构象多态技术（PCR—SSCP） 北医大一院开展了应用Hp基因组DNA203bpPCR产物的单链构象多态（SSCP）分析和鉴定临床分离的Hp菌株方法。该方法简单快速、敏感性强、图形简单、易于比较。PCR—SSCP不仅可以用于大规模的Hp流行病学调查，而且能准确评估治疗后再现的Hp是复发还是再感染。 中山医大一院应用随机引物扩增的DNA多态指模技术鉴别不同菌株的Hp重复性良好。 [b]5　15N尿素的排泄试验[/b] 上海二医大新华医院根据呼吸试验类似的原理，让受试者口服稳定性同位素[SB]15[/SB]N标记的尿素，然后测定尿素中排出的[SB]15[/SB]NH[XB]3[/XB]来判断胃内Hp的实际感染状况，其敏感性为96％。 综上所述，做为科学研究最好能同时使用几种检查方法，至少应选择其中两种，取长补短，提高准确性。由于Hp在胃内分布不均匀，提倡多点取材，治疗后长期随访，国外建议将连续二次呼吸试验阴性加上抗Hp抗体滴度进行性下隆持续1a以上做为“金标准”。