5　分子生物学方法

多聚酶链反应　多聚酶链反应（Poly-merasechain reaction，PCR）实际上是一种核酸片段体外扩增试验。做这一试验的先决条件是首先必须弄清楚某一基因的核苷酸序列然后人工合成其中两个特异性处段（其长度以15—30个碱基为宜，不宜过短或过长）作为引物，在PCR仪中经过30—50个温度循环扩增其核酸片段，使其呈几何级数长，然后取其产生或其酶切片段在琼脂糖上跑电泳，即可判断所得产物是否即企望的基因产物。目前亦已可用这一反应来测知标本中有无Hp的存在，甚至还可进一步用核苷酸序列分析或特异性探针加以鉴定。关于Hp的PCR根据所选引物的不同已经有许多种，已知的这些引特主要来自Hp的尿素酶基因（UreA，UreB，UreC，UreD），16SrRNA和编码26KDa蛋白质的核苷酸序列，纵观不同学者所选用的引物，现在都能特异地以Hp有关基因作模板，扩增出部分核苷酸序列，而不引导扩增了其他细菌核苷酸序列。因此对Hp检测的特异性和敏感性均较高，目前已开始用于各种临床标本（活检、胃液、牙菌斑等）的检测和某些动物胃标本的检测，有人还用PCR扩增后所得的DNA产物，以核酸内切作指纹图谱分析，用于Hp的流行病学研究。随着PCR的发展，Williums等在这一基础上又发展出了RAPD（Randmoamplified polymorphic DNA）技术或称AP(arbitrary primer)—PCR。它的原理是采用随机选出的单一核苷酸链为引物以靶DNA模板在多个部位引导扩增DNA。经过RADP技术处理的结果可显示出不同Hp株的特异性。因此亦有人把此方法用于Hp的流行病学研究上。随着分子生物学技术的不断发展，PCR技术的应用在Hp的研究中很有前途，它反应快，标本运输条件要求不高，甚至可以邮寄，可是PCR的高敏感性也可能是它致命的弱点：使用试剂的浓度，操作的温度，过度的扩增，极少DNA的污染等都可导致假阳性，因此严格控制件，合理选择DNA扩增循环次数，谨防污染仔细设置对照等都是不可忽视的因素。 总之，Hp感染有许多方法检查，最简便的，成本最低廉的，仅有极小侵袭性的是血清学方法。可是，血清学阳性只能说曾感染过或现在正在感染，[SB]13[/SB]C(20)和[SB]15[/SB]N(21)同位素示踪方法是完全无损伤性的，且能检测即时使整个胃的感染情况。因此是比较理想的。可是由于受设备限制，费用较贵难于普遍推广，[SB]14[/SB]C同位素示踪法虽然大医院有条件可做，价格比[SB]13[/SB]C，[SB]15[/SB]N便宜，但有放射性损害，内窥镜检查取活检标本是侵袭性的，可作微生物学的直接检查，同时可以观察组织学变化，亦可为分子生物学检查提供材料，若欲简单一些，可以只做快速尿素酶试验，最后，从活检标本分离培养Hp，虽然因验一些，但对选择合适的抗Hp治疗方案是必备条件。