四、消化系统药理实验中的选择与应用

[b]（一）消化系统分泌实验[/b] 1．胃液分泌实验　胃液收集常选用狗和大白鼠。由狗右侧嘴角插入胃管收集胃液，大白鼠则需剖腹，从幽门端向胃内插入一直径约3mm的塑料管，在紧靠幽门处结扎固定，以收集胃液，可进行胃酸的测定和胃蛋白酶的测定。 2．胰液分泌实验　胰液收集可选用狗、兔或大白鼠。在全麻下进行手术，狗在主胰管开口十二指肠降部，距幽门12cm左右处，要将十二指肠翻转，在其背面即可找到。兔的胰腺很分散，胰管位于十二指肠的升段，距离幽门约17cm左右处。分别向主胰管内插入细导管收集胰液。大白鼠的胰管与胆管汇集于一个总管，在其入肠处插管固定，并在近肝门处结扎和另行插管，就可分别收集到胆汁和胰液。大白鼠的胰液很少，插入内径约0.5mm的透明导管后，以胰液充盈的长度作为观察胰液分泌的指标。慢性实验时可选用狗作胰瘘手术后收集胰液。 3．胆汁分泌实验为了观察某些药物对泌胆、排胆以及存在于胆系内结石的影响，需要研究用药前后胆汁流量及其成分的变化。胆汁可分别给动物作胆囊瘘和总胆管瘘收集。胆囊瘘常选用狗、猫、兔和豚鼠进行，而以狗为佳。在全麻下进行手术，以右肋缘下横切口的暴露最为满意。如欲观察肝胆汁的分泌情况需要结扎胆囊管或选用大鼠，因后者无胆囊，所以作总胆管造瘘手术常选用大白鼠。收集胆汁后可进行各种胆汁的化学分析。 [b]（二）消化系统运动实验[/b] 1．动物离体标本实验消化道平滑肌具有肌源性运动的特点，动物离体的肠段、胆囊、乃至胃肠肌片，只要具有合适的存活环境就可保持其运动机能。这是药理学研究中常用的一种离体实验方法，这具有实验条件较易控制、操作较简单、用一般仪器设备即能工作等优点，从而应用较广。 标本制备大都选用兔、豚鼠、大白鼠等动物的组织，也可利用手术中取下或猝死剖检时取下的消化道器官进行实验。 取禁食24小时的动物，通常用击头致毙法处死，以避免麻醉或失血等对胃肠运动机能的影响。立即常规剖腹，取出所需的胃、肠、胆囊等，去除附着的系膜或脂肪等组织。迅速放在充氧（或含5%CO[XB]2[/XB]）、保温（37℃）的保温液中，并以注射器用保温液将管腔内的食物残渣洗净。操作时动作要轻柔，冲洗时不宜采取高压以免疫组织挛缩。 若以肌片为标本，一般剪取1～5mm宽，1～2cm长的一段即可。若用动物的肠管做实验时，通常取十二肠或回肠。十二指肠的兴奋性、切律性较高，呈现活跃的舒缩运动。回肠运动比较静息，其运动曲线的基线比较稳定。所用的标本大都取1.5cm左右一段即可。以狗的胆囊做实验时可截取4mm宽，2cm长的全层肌片。兔、豚鼠等的胆囊较小，取材时常与胆管一起摘下。兔的胆囊可沿其长轴一剖为二，豚鼠则可以整个胆囊或取其半进行实验。做胆管的离体实验量，通常取狗的总胆管，将相联的十二指肠组织切除，留下乳头以及胆道末端括约肌组织。 离体胃、肠运动的电活动，除了峰形电位外还可记录到周期性的慢波。它们在胃肠道的不同部位以及不同种属的动物间存在一定差异（见表10-32）。 表10-32　离体胃肠组织的慢波频率（次/分）

组　织	人	狗	猫
胃	3	5	4
十二脂肠	12	18	18
空　肠	10	17	16
回　肠	8	10	12

2．消化器官运动在体实验　利用整体动物观察消化道动物的方法很多，诸如肠管悬吊法、内压侧定法、生物电记录法、腹窗直视法以及X线检查等等。这皯方法各有所长，也各有其不足之处，在进行药理研究时可以酌情选用。 常选用狗、猫或兔，择其健康成年者，性别不构。由于巴比妥麻醉剂对消化道运动有抑制作用，故有些作者用猫或兔做实验时，愿意用乌拉坦1.0～1.5g／kg静脉或腹腔注射进行麻醉。观察胆道系统的运动则以母狗为佳，因为肋弓角较大容易暴露。在禁食12～24小时后进行实验。 进行胆道口括约肌部胆道内压测定实验时，大都选用狗或猫，也可用兔。狗的胆道位置较深，要求良好的手术暴露。猫的总胆管相对地较粗，操作也较容易，但手术耐受性稍逊于狗。兔的总胆管容易瓣认，壶腹部明显地呈现于十二指肠第1段的表面，但组织纤维，操作时务必仔细。狗的总胆管粗约2～3mm，位于十二指肠降部、循小网膜右缘而下，在下腔静脉之前、门脉之右。 [b]（三）催吐、镇吐、厌食实验[/b] 1．催吐和镇吐实验常选用狗和猫做实验。给狗皮下注射盐酸阿朴吗啡1mg/kg；注后2～3分钟就可以引起恶性呕吐。用1%硫酸铜或硫酸亚铅溶液50ml给狗灌胃，约2～3分钟后也可引起呕吐，但几乎无恶性现象。 2．厌食实验　这是防治肥胖病及其并发症的研究内容之一。可以选用狗、猫、大鼠、小鼠等进行实验，猴因有颊囊，且有精神因素参与，故选用者不多。狗容易呕吐，也有行为因素，故也不理想。一般多选用大白鼠。 [b]（四）消化系统常见病动物模型[/b] 1．胃病　急性胃炎的实验模型常选用大白鼠。实验前禁食24小时，以水杨酸制剂（如20ml的阿司匹林或水杨酸溶液）按100mg/kg给药，或以10ml的醋酸或不同浓度的盐酸（1、10、100ml），或同种动物胆汁、2ml的牛磺胆酸、15%的乙醇等单独或几种合用灌胃，4小时后动物胃内发急性弥慢性炎症变化。 慢性胃炎的实验模型常选用慢性胃瘘狗，每日经瘘灌70～75℃的热水300ml，连续60天后可引胃粘膜萎缩，胃酸减少甚至缺失。还可用同种或自身的胃液（按4～5ml/kg取胃液，并浓缩50倍），或胃粘膜的生理盐水的组织匀浆与Freund佐剂以1：1配成乳剂，皮下注射进行免疫，隔15～30天再注射一次，即可诱发致胃粘膜发生细胞浸润及萎缩性病变。 急性胃溃疡的实验模型常选用200～250g的成年大白鼠，用浸水刺激造成应激性溃疡。 结扎大白鼠幽门可诱发成胃溃疡，其成功率与动物禁食情况以及结扎后经历的时间等有关。一般诱发成功率达85～100分，是最常用的模型之一。 组织胺法常选用雄性白色豚鼠，禁食18～24小时，全麻下找出十二指肠，在十二脂肠的胆管开口上方夹一动脉夹造成狭窄，以使胃液潴留并防止十二脂液返流入胃。皮下注射磷酸组织胺水溶液（2.5～7.5mg/kg，根据动物品种而剂量不同），1小时后即可恒定地复制出胃溃疡。 慢性胃溃疡的实验模型常选用大白鼠。可用热烙法或醋酸浸溃造成胃壁损伤形成溃疡。热烙法是在无菌剖腹后，以3mm粗的15W电烙铁加热至45℃左右，灼烙腺胃约5秒种后粘膜出现水肿，6小时后有明显出血。醋酸浸溃法可用10%或20%醋酸溶液0.05ml，用0.01ml刻度的结核菌素注射器利用26号皮内针头作胃壁粘膜注射或以棉签蘸100％醋酸溶液通过内径5mm的玻璃管涂敷胃浆膜面或剖开胃腔涂于粘膜面引起腐蚀性溃疡。 2．肠病　肠梗阻实验模型常选用狗。在单纯结扎肠管24小时后，即可见梗阻以上肠段明显扩张。也可采取结扎肠系膜血管、人工造成肠套或肠扭转等方法复制。 肠粘膜实验模型通常选用狗，不能选草食动物，因其阑尾无论在结构或机能上均与人的阑尾有较大差别。狗虽也差别，但狗的阑尾粗而长，容易处理。 溃疡性结肠炎实验模型可以选用大白鼠，通过免疫方法制备。一般是用同种或异种动物的结肠粘膜匀浆加Freund佐剂，给大白鼠足跖肉垫内注射，约10天后随着血清抗结肠粘膜抗体滴度的升高和便血，在盲肠与结肠出现溃疡性结肠炎变化。也可给兔结肠浆膜下反复多次注射卵白蛋白或向兔的上肠系膜动脉内注射内毒素均可造成溃疡性结肠炎变化。 3．腹膜炎　细菌性腹膜炎是以生理盐水稀释肉汤培养的大肠杆菌液，制成1×108/ml菌量的悬液，给豚鼠腹腔注射可以规律性地引起严重的腹膜炎，大都在24～48小时内死亡。若菌量小，毒力低，有进就不易造成实验性腹膜炎，用大鼠和小鼠做实验时尤其如此。 4．胰腺炎　急性胰腺炎实验模型大都选用雄狗，且以体重在15公斤以上者为佳。较小的狗狗胰管细，雌狗脂肪多，均可影响手术操作。在无菌操作下，分离出主胰管。若在结扎主胰管的同时，饲以高蛋白、高脂肪食物，或注射促胰激素使胰液分泌增加，可以诱发一过性的胰腺水肿，如果在结扎胰管的同时暂时阻断胰动脉或以有活性的胰蛋白酶作动脉内注射则可导致现血性胰腺炎。 慢性胰腺炎实验模型常选用大白鼠或豚鼠，以含0.5％量的dl-乙硫氨酸饲料喂养动物1～2个月；或每日用该药250mg作腹腔注射，连续10天即可引起胰腺泡破坏和炎细胞浸润。也可选用大白鼠，用20％乙醇置于滴瓶中代替饮水，让动物自由吮吸，持续8个月以上，即可使胰腺细胞内出现脂肪滴，线粒体和胞浆呈退行性变。若饮用20～30个月则可出现腺泡萎缩、腺管上皮增殖，小叶内有散在结缔组织增生以及腺管内出现蛋白栓等变化。 5．胆结石　使动物胆道发生感染，胆汁淤积，胆固醇代谢发生障碍等均可使动物胆道形成胆石。复制胆石模型的方法很多，食饵法，常选用叙利亚地鼠，体重60g左右，喂高糖、不含非饱和脂肪酸饲料（蔗糖74%、酪蛋白21%、食盐4.4%、胆碱0.1%、浓缩鱼肝油0.5%），每只地鼠5～9g/次，每天2次，14～21天胆囊内形成明显结石，22天后成石率高达100%。也有选用健康雌性豚鼠，饲鼠基础食料中加入酪蛋白1%、蔗糖1.5%、猪油1%、纤维素1%、胆酸0.02%、胆固醇0.05%的成石饲料，2个月后在90%的豚鼠胆囊中产生了以胆色素为主的结石，其成份和结构与人类的胆色素结石相似。 感染成石法常选用健康成年家兔、大白鼠成狗。采用无菌手术，暴露家兔十二指肠，从十二指肠乳头插入塑料管，由此管注入蛔虫卵或大肠杆菌，同时还可从此管抽取胆汁进行细菌培养和分析。注入蛔虫卵后7个月，胆囊内可形成结石。狭窄成石法常选用健康成年家兔、狗或猴，但家兔的诱发率高。无菌手术探明胆道及胆囊正常，用银夹适当地夹住兔胆囊颈部，以产生部分梗阻。结果6个月后家兔胆囊中有明显结石形成。 切除迷走神经干成石法常选用成年狗或兔。采用无菌手术探明家兔胆道及胆囊正常，然后暴露胃、贲门及食管，将食管悬吊，暴露两侧迷走神经干，分离后从食管下端切除两侧迷走神经干各1.5～2cm，手术后4～5周有胆固醇结石形成。 异物植入成石法常选用成年健康狗或兔。动物麻醉后，在无菌操作下暴露胆囊，在胆囊底部剪一小口，植入蛔虫碎片或人胆石、线结、橡皮等，用小圆针荷包缝合剪口，植入2～3月后胆囊内可见到多数黑色细砂，植入的异物可被墨绿色的胆石成份所包裹，若植入数个异物则有时可以被粘结成一个大的团块。